分子生物学
どのくらいの量のcDNAを使用すればよいか分からないですか？まだcDNA濃度を測定していますか？
定量PCR（qPCR）は分子生物学で広く用いられている手法であり、簡単そうに思われがちです。しかし、qPCR実験の成功は、数多くの微妙ながらも重要な要素に左右されます。最も見落とされがちな要素の一つがcDNAテンプレートです。cDNAの質と量が実験の成功を直接左右します。cDNAの調製が不十分...
TRIzolを用いたRNA抽出における一般的な問題とトラブルシューティング
TRIzol試薬は主にフェノールとグアニジンイソチオシアネートを含みます。これらの成分は細胞を急速に溶解すると同時に、サンプルから遊離したRNaseの活性を阻害します。TRIzolは細胞を破壊し、タンパク質を変性させることで、核酸とタンパク質の分離を可能にします。溶液のpHによって、DNAとR...
核酸定量に適切な方法を選択していますか?
核酸抽出は、ほとんどの分子生物学研究室で日常的に行われている手順です。抽出されたDNAまたはRNAは、qPCR、次世代シーケンシング（NGS）ライブラリ調製、逆転写といった下流アプリケーションでよく使用されます。これらの実験を成功させるには、核酸の正確な定量が不可欠です。では、サンプルに適した...
核酸ゲル電気泳動のトラブルシューティング - 一発で解決！
導入
アガロースゲル電気泳動は、おそらく研究室で最初に行う実験の一つでしょう。今日は、この重要な技術について、その基本原理から実践的なヒント、そしてトラブルシューティング戦略まで、詳しく見ていきましょう。
I. 原則セクション
1)アガロースゲル電気泳動の原理は何...
GMPグレード組換えヒトbFGF/FGF2 — 幹細胞培養における重要な因子
01 概要
塩基性線維芽細胞増殖因子（bFGF）は、線維芽細胞増殖因子-2（FGF-2）とも呼ばれ、少なくとも22種類の構造的に関連するタンパク質を含むFGFファミリーのメンバーです。FGFファミリーのメンバーは、広範な細胞分裂促進作用と細胞生存活性を示し、胚発生、細胞増殖、形態形成...
なぜ融解曲線が奇妙に見えるのでしょうか?
qPCRにおける異常な融解曲線のトラブルシューティング
qPCR実験において、融解曲線は産物の特異性とデータの正確性を確保するために不可欠です。異常な融解曲線は、様々な潜在的な問題を示唆する可能性があります。これらの不規則性は何を示しているのでしょうか？データの解釈にどのような影響を与え...
増幅曲線にスパイクが現れる理由
完璧な増幅曲線は予測可能なパターンに従いますが、異常な曲線は様々な奇妙な形で現れることがあります。特にABI機器でよく見られる問題の一つは、急激な上昇スパイクを伴う曲線です。その原因は？ ROXの選択が不適切であることです。では、 ROXとは何か、何をするのか、なぜこのような曲線の不規則性を引...
無料ガイド: PCR 最適化のヒントトップ 5
PCR (ポリメラーゼ連鎖反応) は分子生物学の基盤技術で、遺伝子クローニング、診断テスト、研究に広く使用されています。PCR は高速で効率的、かつ非常に特異的ですが、経験豊富な研究者でも実験の結果に影響する微妙な落とし穴に遭遇することがあります。PCR 実験のトラブルシューティングと最適化に...
PCR、核酸電気泳動、実験技術ハンドブック
第1章 PCR技術
1.1 PCRの原理
PCR（ポリメラーゼ連鎖反応）またはポリメラーゼ連鎖反応は、 DNAの親鎖をテンプレートとして特定のプライマーを用いてDNAポリメラーゼが触媒する反応を指します。 出発点の延長のために、dNTP、Mg 2+および 拡張因子、増幅増...
Hieff Clone Universal II ワンステップクローニングキット —— 1～7 フラグメントワンステップクローニング
多重断片または超長断片の相同組換えの効率が低く、コロニーの数が少ないことにまだ悩まされていませんか?
それでも、キャリアやフラグメントは貴重で、収量が低いため、原材料を節約するために、小さなシステムで低濃度のライゲーションを使用していますが、ライゲーション効率が低くて困っていますか?
...
YEASEN Hieff UNICON™シリーズの染料ベースの蛍光定量試薬は美しい曲線の作成に役立ちます
蛍光定量PCRは非常に感度の高い実験であり、実験者による操作には高い精度が求められます。そのため、qPCR実験の過程では、以下のような問題に必ず遭遇します。
I. 非実験的要因に関する問題
研究室には多数の qPCR 実験プロジェクトがあり、機器が占有されているため、慎重に準備された...
Hieff Canace™ シリーズ高忠実度 - 高速高忠実度、5 秒/kb で忠実度と速度を保証します。
従来のハイフィデリティ酵素を用いたPCRでは、いくつかの厄介な問題に直面することは避けられません。例えば、フィデリティが十分でない場合、増幅断片をシーケンシングした後でも標的塩基に変異や欠失が生じる可能性があります。また、増幅時間も比較的長く、5kbの断片を増幅するのに2時間近くかかることもあ...