マイコプラズマの検出、予防、除去 - すべて 1 つのステップで!
マイコプラズマ
マイコプラズマ（マイコプラズマとも呼ばれる）は、直径0.1～0.3μmと、これまでに発見された原核生物の中で最も小さく、最も単純な生物です。フィルターを通過でき、球状、桿状、糸状、枝分かれ状など、様々な形状をとる高い多形性を示します。実験室やバイオ医薬品製造において、細胞培養はマイコプラズマ汚染の影響を受けやすいとされています。文献によると、保存細胞株におけるマイコプラズマ汚染の発生率は約15～35%であり、バイオ医薬品業界では0.44～6.70%の範囲です[1] 。
図1：マイコプラズマの形態
マイコプラズマ汚染の影響
細菌や真菌による汚染は比較的容易に検出、予防、除去できますが、マイコプラズマ汚染は気づきにくいものです。増殖密度が10^7～10^9 CFU/mlと非常に高い場合でも、濁度やpHの変化といった明らかな汚染の兆候が現れない場合があります。マイコプラズマ汚染は、細胞に様々な変化を引き起こす可能性があります（図2参照）。
図2：マイコプラズマ汚染後の細胞状態の変化
マイコプラズマ検出の応用シナリオ
マイコプラズマ汚染の典型的な発生源
- 細胞間の相互汚染;
- 作業環境や実験装置の汚染。
- 実験者の無菌技術が不十分であった。
- 培養培地やその他の試薬の汚染;
- 細胞調製に使用された元の組織または臓器の汚染。
細胞培養でマイコプラズマ汚染が発生した場合の対処法
図3：マイコプラズマ汚染に対するトータルソリューション
細胞内のマイコプラズマ汚染に対する3つのソリューション
1. マイコプラズマ検出
ワンステップ等温マイコプラズマ検出：
Yeasenのワンステップ等温マイコプラズマ検出試薬は、独自の等温増幅技術を採用しており、青紫色（陰性）から空色（陽性）まで、より優れた色識別を実現し、目視による識別を容易にします。また、偽陽性を排除するための汚染防止成分も含まれています。
図4：ワンステップマイコプラズマ検出の操作プロセス
PCRによるマイコプラズマ検出：
YeasenのPCRマイコプラズマ検出法は、従来のワンステップPCRとは異なり、プライマーを1組ではなく3組使用し、マイコプラズマの16Sおよび23S保存領域を標的としたネステッドPCR増幅を行います。これにより、感度が大幅に向上し、非特異性も低減され、マイコプラズマコピー数が1個からでも検出可能です。
図5：マイコプラズマ濃度の異なるサンプルのPCR増幅のゲル電気泳動画像
図6：マイコプラズマ濃度の異なるサンプルのPCR増幅のゲル電気泳動画像
表1：イェーゼンのワンステップ等温マイコプラズマ検出試薬で検出可能なマイコプラズマの種類
注: 青い部分は、ワンステップ等温検出法と PCR 法の両方で検出可能なマイコプラズマの種類を示しています。
2. MycAwayマイコプラズマ除去試薬（1000倍）
MycAwayマイコプラズマ除去試薬（1000倍）は、細胞に害を与えることなく、マイコプラズマの増殖に必要なDNAと必須タンパク質の合成を阻害することで、マイコプラズマを効果的に除去する混合製剤です。細胞を最大限に救済し、マイコプラズマ汚染による損失を軽減します。
図7: 細胞除去効果の実証
マイコプラズマ除去試薬の特徴：
- 低毒性:細胞毒性が最小限で、細胞生存率試験やトランスフェクションなどのその後の細胞実験に影響を与えません。
- 高い安定性: 効果を維持しながら -20°C で長期間保管できます。
- 使い方は簡単：マイコプラズマに汚染された培養培地に製品を加えて培養するだけです。
- 速効性：わずか 3 日で目に見える結果が現れます。
- 広範囲スペクトル: ほとんどの実験室マイコプラズマ型に対して効果があります。
図8：マイコプラズマ除去試薬の細胞毒性試験図
3. マイコプラズマ予防
製品情報
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カテゴリ |
製品名 |
カタログ番号 |
仕様 |
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検出 |
40612ES25/60 |
25/100 T |
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40615ES25/60 |
25/100 T |
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40619ES25/60 |
25/100 T |
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40614ES10/20 |
10/20アッセイ |
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除去 |
MycAway™ スプレー（そのまま使用可能） |
40605ES02/03 |
1/2×500mL |
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40607ES03/08 |
1/5×1mL |
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防止 |
40608ES03/08 |
1/5×1mL |
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40609ES60 |
100mL |
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40610ES60 |
100mL |