酵素切断効率が高く、RNase 残留物がないため、さまざまなシナリオに適しています。
実験室では頻繁に使用されていますが、 RNA定量の精度に影響を与えずにRNAサンプル中の混入DNAを除去することは、多くの研究者にとって依然として課題となっています。この問題を解決するためのゴールドスタンダードであるDNase I（デオキシリボヌクレアーゼI）は、その独自の二本鎖/一本鎖DNA分解能力により、RNA研究において重要な役割を果たしています。
消化条件 | DNase Iの働き
DNase Iは、一本鎖DNAまたは二本鎖DNAを分解できる非特異的エンドヌクレアーゼです。リン酸ジエステル結合を加水分解し、5'-リン酸基と3'-OH基を含むモノデオキシヌクレオチドおよびオリゴデオキシヌクレオチドを生成します。DNase Iの最適作用pH範囲は7～8です。活性はCa 2+に依存し、Mn 2+ 、Mg 2+ 、Zn 2+などの二価金属イオンによって活性化されます。
- Mg 2+が存在すると、DNase I は二本鎖 DNA の任意の部位をランダムに切断します。
- Mn 2+が存在すると、DNase I は DNA 二重鎖を同じ部位で切断し、1～2 ヌクレオチドが突出した平滑末端または粘着末端を形成できます。
図1. Mg2 +およびMn2 +存在下でのDNase IによるdsDNAの切断の模式図
従来のDNase I技術は、困難なジレンマに直面しています。牛膵臓抽出法は原料源が複雑で、RNase残留の問題が顕著です。精製プロセスは煩雑なだけでなく、製品の均一性を確保するのも困難です。また、大腸菌発現システムは生合成メカニズムに依存しており、生産上限の問題に直面しています。
組換えDNase I（RNaseフリー、酵母）（カタログ番号14549/14550）
YeasenBio は業界の問題点に直接取り組み、酵母発現組換え DNase I (RNase フリー、酵母) (カタログ番号 14549/14550)を発売しました。真核生物発現システムの独自の利点を活用して、2 つのコア技術のブレークスルーを達成しました。
- 生産性の突破口：真核生物の分泌発現技術を利用して細胞内毒素の蓄積を効果的に回避するとともに、高密度発酵技術を組み合わせて多面的に生産能力を向上させ、大規模生産のニーズに対応します。
- パフォーマンスの向上:酵母システムの自然なグリコシル化修飾により、酵素の空間構造がより安定し、複雑なサンプル環境でも DNA を効率的に消化できるようになります。
主な製品の利点
- 超強力な消化活動
1 μg のプラスミド DNA を、Yeasen および他のブランド サプライヤー A の異なる量の DNase I で消化しました。結果は、Yeasen 14549ES のプラスミド DNA 除去効率がサプライヤー A のものと同等であることを示しました。
図2 プラスミドDNA除去効果の検証
- RNase残基なし
YeasenBioの組換えDNase I（RNaseフリー、酵母）（品番：14549） 10単位をRNA基質と37℃で1時間インキュベートしました。アガロースゲル電気泳動分析の結果、酵素調製物の3バッチにおいて残留RNase活性は検出されませんでした。これにより、RNAサンプルの劣化リスクが完全に排除され、極めて高い純度が求められるRNA分析シナリオにおいて信頼性の高い保護を提供します。
図3 RNase残基結果の検証
- RNA抽出アプリケーションの検証
YeasenBioのReco mbinant DNase I（RNaseフリー、酵母）（品番：14549）のRNA抽出における適用効果を評価するため、本酵素製剤20単位を用いて、異なる由来のマウス肝臓前処理サンプル12個を処理しました。その後のRNA抽出およびアガロースゲル電気泳動分析により、酵素処理群のRNAの完全性は良好であることが確認されました。これは、本DNase IがRNAの品質に影響を与えることなくDNAを効果的に分解し、RNA抽出実験の技術要件を完全に満たしていることを示しています。
図4 RNA抽出アプリケーションの検証
DNase I 選択ガイド
さまざまなアプリケーション要件を満たすために、 YeasenBio は、牛膵臓抽出物、大腸組換え発現、酵母組換え発現の 3 つのソースから DNase I を提供できるほか、GMP グレードの DNase I も提供できます。
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説明 |
カタログ番号 |
応用 |
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牛膵臓からクロマトグラフィーで抽出した、極めて低いRNase A活性を持つ製品です。凍結乾燥粉末として入手可能です。 |
1. サンプルからRNAを抽出する際にgDNAを除去します。（微量サンプルの場合は、組み換えDNase Iが必要です）。 2.タンパク質研究：タンパク質調製物から DNA を除去します。 |
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牛膵臓から抽出し、クロマトグラフィーで調製した、極めて低いRNase A活性（≤0.0005%）を有する製品です。凍結乾燥粉末として入手可能です。 |
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大腸菌で発現した DNase I (RNase フリー)、大腸菌で発現した組み換え体、RNase フリー、液体形態。 |
さまざまな用途に適しています:
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Pichia pastoris で発現した DNase I (RNase フリー)、RNase フリー、液体状。 |
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14550ES |
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大腸菌で発現した DNase I (RNase フリー) 、GMP グレード、液体の形で入手可能。 |
GMP医薬品グレード。医薬品原料および添加剤の製造に使用されます。GMP準拠の製品製造および品質管理手順により、製造プロセスとすべての原材料の追跡可能性が確保されます。 |
参考文献
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