T7ファージの遺伝子6によってコードされているT7エキソヌクレアーゼは、強力な酵素活性を示す、非常にプロセッシブな5'→3'エキソヌクレアーゼです。この酵素は、二本鎖DNA（dsDNA）またはRNA-DNAヘテロ二本鎖を特異的に触媒し、5'リン酸化末端または5'ヒドロキシル末端から加水分解を開始します。酵素反応は、オリゴヌクレオチドおよびモノヌクレオチド産物の連続的な遊離によって進行します。
特筆すべき点として、T7エキソヌクレアーゼは独自の基質多様性を示し、5'末端だけでなく、二重鎖構造内の切断部やギャップにおいても分解を開始できます。さらに重要な点として、本酵素は厳格な基質特異性を示し、一本鎖RNA分子および二本鎖RNA分子のいずれに対しても検出される活性を示しません。この特性により、選択的な核酸処理を必要とする分子生物学アプリケーションにおいて特に有用です。
図1. T7エキソヌクレアーゼの酵素活性の模式図
これらの独特の特性により、T7 エキソヌクレアーゼは、シームレスクローニング、一本鎖 DNA テンプレートの調製、ランダム突然変異誘発ライブラリの構築、非環化線状テンプレートの消化など、分子生物学研究におけるいくつかの重要なアプリケーションで極めて重要な役割を果たします。
研究者の高品質酵素へのニーズに応えるため、YeasenはT7エキソヌクレアーゼを新たに発売しました。本製品は強力な消化活性を示し、厳格な品質管理を受けており、ニッカーゼ活性やRNase活性の混入がないため、実験結果に支障をきたすことはありません。
Yeasen T7エキソヌクレアーゼ（Cat#14272）の特性
- 優れた酵素消化性能
図2. Yeasen社およびサプライヤーA社のT7エキソヌクレアーゼ製剤におけるDNA消化および熱不活化特性の性能評価*
注：25℃、30分の反応条件下で、サプライヤーA*社製T7エキソヌクレアーゼ10UとYeasen社製T7エキソヌクレアーゼ3バッチを用いて、子牛胸腺DNA 1μgに対する分解効率を比較しました。さらに、75℃、20分および80℃、10分のインキュベーション後のT7エキソヌクレアーゼの熱不活化効率を評価しました。その結果、3バッチ全てのYeasen社製T7エキソヌクレアーゼが基質を効果的に分解し、75℃、20分および80℃、10分のいずれの条件でもT7エキソヌクレアーゼは不活化されました。
- ニッカーゼまたはRNase残基は検出されない
図3. Yeasen T7エキソヌクレアーゼ調製物中のニッカーゼおよびRNase残留活性の分析
[注記]： T7エキソヌクレアーゼを核酸基質とそれぞれインキュベートし、アガロースゲル電気泳動によりバンドパターンを解析した。実験結果から、Yeasen T7エキソヌクレアーゼの3ロットのいずれにおいても、残存ニッカーゼ（100 U）およびRNase（10 U）活性は検出されなかった。
注文情報
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製品名 |
梱包仕様 |
カタログ番号 |
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T7エキソヌクレアーゼ（10 U/μL） |
1000単位 / 5000単位 |
14272ES |
拡張読書
1. DNase I の謎を解明 | 酵母で DNase I を発現させることで、従来の技術のボトルネックを打破する方法。
参考文献
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[3] Tabor S, Richardson C C. バクテリオファージT7DNAポリメラーゼのエキソヌクレアーゼ活性のin vitro変異誘発による選択的不活性化[J]. Journal of Biological Chemistry, 1989, 264(11): 6447-6458.