Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (Low Rox) _ 11189ES
Roulez l'image pour zoomer Cliquez sur l'image pour zoom
Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (Low Rox) _ 11189ES
Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (Low Rox) _ 11189ES
Le mélange maître Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR (Low Rox) est une pré-solution pour l'amplification PCR quantitative en temps réel 2×, caractérisée par une intensité de fluorescence élevée, une sensibilité et une spécificité élevées et un rendement d'amplification élevé. Le composant principal, l'ADN polymérase Hieff UNICON™ Taq, est démarré à chaud par la méthode des anticorps, ce qui peut inhiber efficacement l'amplification non spécifique causée par le recuit de l'amorce pendant la préparation de l'échantillon. Dans le même temps, la formule ajoute des facteurs pour améliorer l'efficacité de l'amplification de la...

Color-Traceable qPCR: Zero Mispipetting

Frequently Bought Together

Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (Low Rox) _ 11189ES

Sauvegarder $15.00
YeasenSKU: 11189ES03
Taille: 1 ml
Prix:
$40.00 $55.00
Action:
En stock

Le mélange maître Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR (Low Rox) est une pré-solution pour l'amplification PCR quantitative en temps réel 2×, caractérisée par une intensité de fluorescence élevée, une sensibilité et une spécificité élevées et un rendement d'amplification élevé. Le composant principal, l'ADN polymérase Hieff UNICON™ Taq, est démarré à chaud par la méthode des anticorps, ce qui peut inhiber efficacement l'amplification non spécifique causée par le recuit de l'amorce pendant la préparation de l'échantillon. Dans le même temps, la formule ajoute des facteurs pour améliorer l'efficacité de l'amplification de la réaction PCR et des facilitateurs pour égaliser l'amplification des gènes avec différentes teneurs en GC (30 à 70 %), de sorte que la PCR quantitative puisse obtenir une bonne relation linéaire dans une large gamme de régions quantitatives. Le produit utilise la réaction de changement de couleur mixte de différents colorants pour surveiller l'opération de pipetage, ce qui réduit efficacement l'apparition d'erreurs de pipetage.

Caractéristiques

Suivi du pipetage : Réduisez le risque d'erreurs d'oubli/d'ajout

Excellente amplification : bonne linéarité sur une large plage linéaire

Haute précision : peut distinguer avec précision les modèles avec une différence de concentration de 2 fois

Bonne répétabilité : faible variabilité interpuits dans les puits répliqués, ce qui se traduit par une meilleure répétabilité

Stable et fiable : le système de réaction peut être stocké à température ambiante pendant 24 heures et le produit reste inchangé après 20 cycles de congélation-décongélation

Applications

Analyse des différences d'expression génétique

Analyse quantitative absolue

Caractéristiques

Concentration

2 ×(Mélange qPCR)

Méthode de détection

Méthode de teinture

Méthode PCR

PCR quantitative

Polymérase

ADN polymérase Taq

Type d'échantillon

ADN

Matériel d'application

Applied Biosystems 7500, 7500 Fast, ViiA7 ; Stratagene MX4000, MX3005P, MX3000P et autres instruments de PCR quantitative par fluorescence qui nécessitent l'ajout de faibles concentrations de colorant de référence ROX

Type de produit

Prémélange pour PCR quantitative par fluorescence en temps réel

Postuler à (candidature)

Expression génétique

Composants

Composants N°

Nom

11189ES03

11189ES08

11189ES60

11189-UN

Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR Mélange principal (Loum (Rox)

1 ml

5×1 mL

100×1 mL

11189-B

Tampon de dilution 10×

1 ml

1 ml

20×1 mL

Expédition et stockage

Ce produit doit être conservé entre -25 et -15 ℃ pendant 1 an.

Chiffres

Figure 1. Des résultats fiables peuvent être obtenus dans la plage dynamique.

En utilisant 2 µL de modèles plasmidiques avec un gradient de 10^1-10^7, les gènes apparentés ont été amplifiés. Hieff UNICON™ Le mélange maître ColorGPS peut détecter efficacement une plage de quantités de modèles de 7 ordres de grandeur, obtenant une bonne linéarité dans une large plage linéaire.

Chiffre2.Peut distinguer avec précision les différences de concentration de modèle de 2 fois.

En utilisant 2 µL de plasmide dilué dans un gradient de 2 fois comme matrice, les gènes apparentés ont été amplifiés. Hieff UNICON™ Le mélange maître ColorGPS peut résoudre avec précision les différences de concentration du modèle.

Chiffre3Une faible variabilité inter-puits est observée, montrant une meilleure répétabilité.

En utilisant des dizaines de copies du plasmide comme modèle, l'amplification a été réalisée avec différents réactifs quantitatifs fluorescents selon les procédures spécifiées dans leurs manuels d'instructions respectifs. Les valeurs d'écart-type indiquent que, par rapport aux autres réactifs de transcription inverse, le nouveau produit présente des différences plus faibles entre les puits répliqués et une meilleure répétabilité.

Chiffre4. Plus flexible, adapté aux procédures standards ou rapides.

Dans la procédure standard, le temps de dénaturation et le temps d'extension sont respectivement fixés à 10 secondes et 30 secondes, tandis que dans la procédure rapide, le temps de dénaturation et le temps d'extension sont respectivement fixés à 3 secondes et 10 secondes, pour détecter les valeurs Ct correspondant à 10 gènes cibles. Les résultats montrent que les valeurs Ct obtenues avec le nouveau produit dans les procédures standard et rapide présentent une forte corrélation, et que le nouveau produit peut obtenir de bons résultats en utilisant la procédure rapide.

Chiffre5Une fois le système réactionnel préparé, il peut rester stable à température ambiante pendant 24 heures.

En utilisant différents gènes de souris, de cellules humaines 293 et ​​d'Arabidopsis thaliana comme cibles, après avoir préparé le système de réaction, celui-ci a été placé dans l'obscurité à différentes températures pendant 24 heures avant la détection. Par rapport au traitement immédiat, la différence de détection pour différents gènes ne dépasse pas 0,5 Ct, ce qui indique que des résultats stables peuvent également être obtenus avec des opérations de longue durée.

Documents:

Manuels

11189_Manuel_Version EN20241218.pdf

Storage

This product should be stored at -25~-15℃ for 18 months.

FAQ

Please refer to the "YiSheng Biotechnology YiSheng Biotechnology Dye Method Fluorescence Quantitative PCR Mix Selection Table" for details. Click here to learn more and help you choose the appropriate reagents.
For molecular enzyme reagents, simply invert and mix them together, then perform a gentle centrifugation. It is not recommended to vigorously shake to mix them.
Refer to the manual. Ultimately, it is necessary to ensure that after being mixed with the template, the volume is exactly 1×. For example, for 20 μL of cDNA stock solution, add 180 μL of sterile ultrapure water to dilute it 10 times, resulting in 200 μL of diluted template. Take 90 μL of the diluted template and add 10 μL of 10× Dilution Buffer, mix well, and then use it. You can choose not to do this, but it will not affect the result.
You can choose to use the cDNA stock solution or dilute it. Just make sure that the Ct value of the gene you want falls within the range of 15 to 30. Generally, for every 10-fold dilution of cDNA, the Ct value increases by 3.3.
Store in a dark place and the reaction system must not be left open. These two points are essential. It can be placed in a 4℃ refrigerator or at room temperature for 24 hours. Before using, gently shake and centrifuge the sample before loading it onto the instrument. Before loading, carefully check if the tubes or plates have been contaminated.
https://cdn.shopify.com/s/files/1/0803/9419/1166/files/bbbb_1024x1024.png?v=1769394213 When designing primers, it is best to cross introns. The design method can refer to "Enjoyable! A single article to understand qPCR primer design, a must-have skill for experimental experts!" Also, validated primers can be selected. The selection method can refer to "Where to find ready-made qPCR primer sequences?"
The possible reasons are as follows:
1. The instrument has not been calibrated for a long time or it is aging. Usually, the instrument needs to be calibrated once a year. It is necessary to have an instrument engineer perform the calibration or replace the aging components.
2. A 10 μL reaction system was used. The normal system is a 20 μL system. Using half of the normal system would result in an excessively low total concentration of Rox, increasing the probability of BadRox occurrence. It is recommended to conduct the experiment using the 20 μL system.
The specificity of qPCR products can usually be determined through the melting curve. If it is still necessary to determine the products through gel electrophoresis, the qPCR product can undergo electrophoresis. Electrophoresis requires Loading Buffer, and the product cannot be directly loaded for electrophoresis.
1. Confirm whether the signal acquisition function is enabled in the program. If a two-step method is used, the signal acquisition should be set during the annealing extension stage.
2.Is the length of the product too long? If the length of the product is set to 500bp or more, this situation may occur. It is recommended that during primer design, the length of the product be controlled within the range of 80-300bp.
3. Are the primers inappropriate? If the primers are not designed correctly, they need to be redesigned. If the primers are correctly designed but seem to be degraded, PAGE electrophoresis can be used to check the integrity of the primers.
4. Template degradation: Prepare the template anew and repeat the experiment.
The analysis is conducted by observing the melting curve. The melting curve shows that the melting peak shape of NTC does not overlap with that of the corresponding gene, and the TM value of NTC is smaller than that of the corresponding gene. In this case, the product corresponding to NTC is a primer dimer. If the melting curve peak shape of the corresponding gene is a single peak, the collection of the signal of the related gene will not be affected. The melting curve shows that the melting peak shape of NTC overlaps with that of the corresponding gene. In this case, the product corresponding to NTC is likely to be the product of the corresponding gene. The system has been contaminated. We need to check one by one whether the water, primers, or reagents have been contaminated. If none of them have been contaminated, it might be aerosol contamination. Based on the obtained amplification data, the ΔCT value is calculated to determine whether the contamination has a significant impact on the system. If ΔCT ≥ 5, it indicates that the contamination has a minor effect and can be ignored.
It indicates the presence of genomic DNA contamination. It is recommended to use an RNA extraction kit that removes the genome for RNA extraction or during reverse transcription by adding a step to remove the genome. Alternatively, when designing the primers, a design across introns should be adopted.
1. If the CT value is less than 30, but the repeatability is very poor, what should we do? Improve the accuracy of sample addition. Avoid adding small volumes and reduce the error of addition. This can be achieved by preparing a large sample system, for example, mixing primers, water, and qPCR mix into a large system or using the method of mixing primers and water into a large system. The large system needs to be mixed evenly. Improve the accuracy of the pipette's aspiration. Pipettes usually need to be calibrated regularly, once a year.
2. What if CT is ≥ 30 but the repeatability is very poor? At this point, due to the low abundance of the effective template, the randomness of collisions between the template and the primers increases, thereby causing a greater difference between the replicons. It is recommended to try adding 2-3 replicons, and then eliminate the data with large differences for data analysis.
The overlapping peaks in the melting curve are located to the left of the main peak. This might be a situation caused by primer dimerization. One possible solution could be to increase the annealing temperature, reduce the primer concentration, or redesign the primers. The overlapping peaks in the melting curve are located to the right of the main peak. a. It is possible that the non-specific amplification occurred due to poor specificity of the primers. The primers need to be redesigned. b. It is possible that the template DNA was contaminated with genomic DNA. It is recommended to use an RNA extraction kit that removes the genomic DNA for RNA extraction, or to add a step of removing the genomic DNA during reverse transcription to reprepare the cDNA template.

Citations

Documents

Applications

Vous pouvez aussi aimer

Enquête

FAQ

Le produit est destiné à des fins de recherche uniquement et n'est pas destiné à un usage thérapeutique ou diagnostique chez l'homme ou l'animal. Les produits et le contenu sont protégés par des brevets, des marques déposées et des droits d'auteur appartenant à Yeasen Biotechnology. Les symboles de marque indiquent le pays d'origine, pas nécessairement l'enregistrement dans toutes les régions.

Certaines applications peuvent nécessiter des droits de propriété intellectuelle tiers supplémentaires.

Yeasen se consacre à la science éthique, estimant que nos recherches doivent répondre à des questions cruciales tout en garantissant la sécurité et les normes éthiques.