D -luciferina, sal de sódio d -40901es

YeasenSku: 40901ES01

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A D-luciferina é um substrato comum para a luciferase e é amplamente utilizada em biotecnologia, especialmente na tecnologia de imagem in vivo. O mecanismo de ação é que a luciferina (o substrato) é oxidada para emitir luz em resposta ao ATP e à luciferase (veja a figura abaixo). Ela é produzida quando há muita luciferina. O número quântico da luz foi correlacionado positivamente com a concentração de luciferase. Plasmídeos portadores do gene codificador da luciferase (Luc) foram transfetados em células e introduzidos em animais de estudo, como ratos e camundongos. In vivo, a fluoresceína é então injetada e as alterações na intensidade da luz são detectadas usando imagens de bioluminescência (BLI) para monitorar a progressão da doença ou a eficácia do medicamento em tempo real, e assim por diante. A influência do ATP no sistema de reação também pode ser usada para indicar energia ou sinais vitais de acordo com mudanças na intensidade da bioluminescência.

A D-luciferina também é comumente usada em estudos in vitro, incluindo análise de níveis de luciferase e ATP; análise de gene repórter; sequenciamento de alto rendimento e vários testes de contaminação. Atualmente, existem três formas de produtos: D-luciferina (ácido livre), sais de D-luciferina (sais de sódio e potássio). A principal diferença está na solubilidade: a primeira é solúvel em água e a solubilidade do sistema tampão é fraca, exceto solúvel em bases fracas, como soluções de NaOH e KOH de baixa concentração, solúvel em metanol e DMSO; O último é facilmente solúvel em água ou tampão, fácil de usar, solvente não tóxico, especialmente adequado para experimentos in vivo. Como solução, não há diferença substancial entre os três produtos na grande maioria das aplicações.

Características

  • Sem radiação, quase inofensivo aos organismos vivos.
  • Bioluminescência, sem fonte de luz de excitação.
  • Tão sensível que você pode detectá-lo em algumas centenas de células.
  • Boa penetração, 3-4 cm de profundidade de tecido ainda podem ser detectados.
  • Alta relação sinal-ruído, forte sinal de fluorescência e boa proteção contra interferências.

Aplicativo

  • No experimento de tumorigênese em camundongos nus, o crescimento do tumor foi observado sem invasão em tempo real, sem medição de remoção do tumor.
  • Para testar o efeito da administração no crescimento do tumor ou na metástase, o substrato de fluoresceína pode ser completamente eliminado em 3 horas, sem interferência no experimento com o medicamento.
  • A localização e distribuição de células estranhas em animais foram detectadas.
  • O gene alvo ou promotor do gene alvo é fundido ao gene da luciferase para detectar alterações na expressão genética durante o tratamento medicamentoso ou a progressão da doença.
  • Monitorar o transplante, sobrevivência e proliferação de células-tronco; Rastrear a distribuição e migração de células-tronco in vivo.

Especificações

sinônimo em inglês (S)-4,5-Diidro-2-(6-hidroxi-2-benzotiazolil)-4-tiazolcarboxílico ácido sódio sal; D-Luciferina firefly, sal de sódio monohidratado;
Nº CAS. 103404-75-7
Fórmula NaC11H7N2O3S2·H2O
Peso molecular 320,32 g/mol
Aparência Pó amarelo claro
Solubilidade Solúvel em água (100 mg/mL)
Pureza (CLAE) ≥95%

Componentes

Componentes No. Nome 40901ES01 40901ES02 40901ES03 40901ES08 40901ES10
40901 D-Luciferina, Sal de Sódio 100mg 500 mg 1g 5g 10g

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Citações e referências:

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Storage

The product should be stored at -15℃ ~ -25℃ for 1 year.

FAQ

There is no difference. The three are merely variations in naming by different companies, and they are all compounds (S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2
- Thiazoline-4-carboxylic acid.
Besides being used for in vivo imaging, fluorescent dye products are also employed in other applications involving luciferase, such as in vitro reporter gene assays, microbial/viral monitoring, pyrosequencing, etc.
Sodium fluorescein: It can be used for cell permeability testing. The permeability of the pigment can be determined by measuring the absorbance value at OD490. D-Fluorescein sodium salt: Used in in vivo imaging and reporter gene systems. It is detected through a cold luminescence module and does not require excitation light stimulation.
The main differences among the three are as follows:
1) Solubility: The salt form is easily soluble in water. The solubility of potassium salt is 60mg/ml, and that of sodium salt is 100mg/ml. Free acid is not easily soluble in water. It can be dissolved by a weak alkaline solution of sodium bicarbonate, and its solubility in methanol is 10mg/ml, and in DMSO is 50mg/ml.
2) Toxicity: The salt form is more convenient to use during the process, especially in in vivo imaging experiments, as it can dissolve in water and thus has less reaction toxicity (Fluorescein is a low-molecular-weight organic compound composed of phenylthiazole and thiazole carboxylic acid groups, which has low toxicity). 3) Usage effect: There is no significant difference. In in vivo experimental studies, the usage rate of potassium salt is higher.
 It has an impact. The purity is above 99%, with a good level of 99%. For 99% pure fluorescein, there is 1% of solid impurities. If these 1 grams of impurities are dissolved in 25 ml of buffer solution (this dilution ratio is the standard dilution method for in vivo imaging experiments), the concentration of the impurities at this time is 0.4 g/L. Assuming the molecular weight of the impurities is 1000 g/mol, then the molar concentration of the impurities is 400 μM. This concentration may inhibit the action of certain enzymes in the cells and may reduce the experimental effect or cause harm to the animals.
The powder should be stored in a dark place at -20 or -70 degrees Celsius. Its validity period is at least one year.
D-fluorescein (D-Luciferin) is a commonly used substrate for luciferase. Its mechanism of action is that under the action of ATP and luciferase, the fluorescent substance (the substrate) can be oxidized and emit light. When there is an excess of fluorescent substance, the number of photons produced is positively correlated with the concentration of luciferase. 2. Native ctenoidin (Coelenterazine native) is an acting substrate for various luciferases such as sea kidney luciferase (Rluc) and Gaussia luciferase (Gluc).
Chemiluminescence, no excitation wavelength required. The emission wavelength of firefly luciferin is 560 nm. The emission wavelength of sea kidney luciferin is 465 nm.
It can pass through the blood-brain barrier, the placental barrier and the blood test barrier, and also enter living cells.
The recommended concentrations are derived from the literature:
1) Injection method: It can be done through intraperitoneal injection or tail vein injection.
2) Injection volume: The scientific approach is to evaluate the injection dose based on the kinetic curve. The initial attempted injection dose was set at 150mg substrate/kg of mouse body weight. Therefore, the purchase quantity can be calculated according to the above method: If there are 10 mice, 22 - 25g, then 33 - 37.5mg of substrate is required.
Approximately 3 minutes after intraperitoneal injection of fluorescein into mice, cells expressing luciferase began to emit light. The intensity reached a stable peak after 10 minutes, and this peak lasted for about 10 - 15 minutes before gradually diminishing. Detection can be conducted within 10 - 15 minutes after the injection. This is for reference only. It is recommended to conduct a preliminary experiment to establish the kinetics curve of luciferase, thereby determining the optimal time for signal detection and the signal plateau period.
To successfully conduct the in vivo imaging experiment, the following conditions are required: The target tissue or cells must express the luciferase gene; the injection of the luciferin substrate must be successful; and the thickness of the tissue at the luminescent site is also a factor. If the experiment fails, the reasons can be investigated from these aspects: whether the luciferase gene is expressed, whether the luciferin substrate was injected correctly, and whether the luminescent site is deep.

Citations

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Investigação

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