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Em eucariotos, o mRNA sofre modificações pós-transcricionais, formando uma estrutura especial na extremidade 5' conhecida como estrutura cap. Essa estrutura desempenha um papel importante na estabilidade, transporte e tradução do mRNA. A enzima capping do vírus vaccinia é uma enzima eficaz que catalisa a formação da estrutura cap. Ela consiste em duas subunidades, D1 e D12, e tem atividade de RNA trifosfatase, atividade de guanililtransferase e atividade de guanina N7-metiltransferase. Ela pode anexar a estrutura cap de 7-metilguanosina (m7Gppp) à extremidade 5' do RNA (m7Gppp5'N).
A enzima de encapsulamento do vírus vaccinia, na presença de tampão de encapsulamento (tampão de encapsulamento), trifosfato de guanosina (GTP), S-adenosilmetionina (SAM) e outros componentes em concentrações apropriadas, é capaz de encapsular o RNA em uma hora, garantindo a direcionalidade correta.
Este kit usa o princípio de um ensaio imunoenzimático (ELISA) de sanduíche de anticorpo duplo para detectar a quantidade residual da enzima de encapsulamento do vírus vaccinia. O padrão da enzima de encapsulamento do vírus vaccinia e as amostras de teste são adicionados a uma placa de enzima pré-revestida com anticorpos anti-enzima de encapsulamento do vírus vaccinia (36709-A), seguido pela adição de um anticorpo de detecção de enzima de encapsulamento marcado com biotina diluída (36709-C) e, finalmente, Estreptavidina-HRP (SA-HRP) (36709-D). Isso forma o complexo anticorpo+antígeno+anticorpo-Biotina+SA-HRP. Após a lavagem, a solução de substrato TMB (36709-H) é adicionada para desenvolver a cor.
Sob a catálise da enzima HRP, o TMB é transformado de incolor para azul e, sob a ação da solução de parada (36709-I), é finalmente convertido para amarelo. A intensidade da cor amarela é positivamente correlacionada com a quantidade de enzima de encapsulamento do vírus vaccinia detectada na amostra.
Componentes
| Não. | Nome | 36709ES48 | 36709ES96 |
| 36709-A | Enzima de encapsulamento anti-vacínia revestida tiras de microtitulação | 48 E | 96 T |
| 36709-B* | Padrão: Enzima de encapsulamento de vacínia | 1 frasco | 2 frasco |
| 36709-C | Detecção Anticorpo: Biotina-conjugado Anticorpos | 60 μL | 120 μL |
| 36709-D | Estreptavidina-HRP | 20 μL | 40 μL |
| 36709-E | Tampão de diluição 1 | 25 mL | 45 mL |
| 36709-F | Tampão de lavagem concentradotaxa (20×) | 25 mL | 50 mL |
| 36709-G | Tampão de diluição 2 | 15 mL | 30 mL |
| 36709-H | Substrato TMB | 8 mL | 15 mL |
| 36709-I | Parar solução | 5 mL | 10 mL |
| 36709-J | Selador de placas | 3 cada | 5 cada |
*O padrão 36709-B é um pó liofilizado.
Envio e armazenamento
Armazenar a 2-8°C. O prazo de validade é de 1 ano quando fechado e 1 mês após aberto.
Ao receber o produto, verifique se todos os componentes estão completos e armazene-os imediatamente na temperatura de armazenamento correspondente.
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