Hieff Unicon ™ colorgps qpcr mestre mix (baixo rox) _ 11189es
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Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR Master Mix (Low Rox) é uma pré-solução para amplificação quantitativa de PCR em tempo real 2×, apresentando alta intensidade de fluorescência, alta sensibilidade e especificidade e alto rendimento de amplificação. O componente principal, Hieff UNICON™ Taq DNA Polymerase, é iniciado a quente pelo método de anticorpo, que pode efetivamente inibir a amplificação não específica causada pelo recozimento do primer durante a preparação da amostra. Ao mesmo tempo, a fórmula adiciona fatores para aumentar a eficiência de amplificação da reação de PCR e facilitadores para equalizar a...

Color-Traceable qPCR: Zero Mispipetting

Frequently Bought Together

Hieff Unicon ™ colorgps qpcr mestre mix (baixo rox) _ 11189es

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YeasenSku: 11189ES03
Tamanho: 1 ml
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Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR Master Mix (Low Rox) é uma pré-solução para amplificação quantitativa de PCR em tempo real 2×, apresentando alta intensidade de fluorescência, alta sensibilidade e especificidade e alto rendimento de amplificação. O componente principal, Hieff UNICON™ Taq DNA Polymerase, é iniciado a quente pelo método de anticorpo, que pode efetivamente inibir a amplificação não específica causada pelo recozimento do primer durante a preparação da amostra. Ao mesmo tempo, a fórmula adiciona fatores para aumentar a eficiência de amplificação da reação de PCR e facilitadores para equalizar a amplificação de genes com diferentes conteúdos de GC (30~70%), para que a PCR quantitativa possa obter uma boa relação linear em uma ampla gama de regiões quantitativas. O produto utiliza a reação de mudança de cor mista de diferentes corantes para monitorar a operação de pipetagem, o que reduz efetivamente a ocorrência de erros de pipetagem.

Características

Rastreamento de pipetagem: reduza o risco de erros de adição/perda

Excelente amplificação: boa linearidade em uma ampla faixa linear

Alta precisão: pode distinguir com precisão modelos com uma diferença de concentração de 2 vezes

Boa repetibilidade: pequena variabilidade entre poços em poços replicados, resultando em melhor repetibilidade

Estável e confiável: o sistema de reação pode ser armazenado em temperatura ambiente por 24 horas e o produto permanece inalterado após 20 ciclos de congelamento e descongelamento

Aplicações

Análise de Diferenças de Expressão Gênica

Análise quantitativa absoluta

Especificações

Concentração

2 ×(mistura qPCR)

Método de detecção

Método de tingimento

Método PCR

qPCR

Polimerase

Taq DNA Polimerase

Tipo de amostra

ADN

Equipamento de aplicação

Applied Biosystems 7500, 7500 Fast, ViiA7; Stratagene MX4000, MX3005P, MX3000P e outros instrumentos de PCR quantitativos de fluorescência que requerem a adição de baixas concentrações de corante de referência ROX

Tipo de produto

Pré-mistura para PCR quantitativa de fluorescência em tempo real

Aplicar para (aplicação)

Expressão genética

Componentes

Componentes No.

Nome

11189ES03

11189ES08

11189ES60

11189-UM

Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR Mixagem Master (euoc Roxo)

1 mL

5×1 mL

100×1 mL

11189-B

Tampão de diluição 10×

1 mL

1 mL

20×1 mL

Envio e armazenamento

Este produto deve ser armazenado a -25~-15℃ por 1 ano.

Figuras

Figura 1. Resultados confiáveis ​​podem ser obtidos dentro da faixa dinâmica.

Usando 2 µL de moldes de plasmídeo com um gradiente de 10^1-10^7, os genes relacionados foram amplificados. Hieff UNICON™ O master mix do ColorGPS pode detectar efetivamente uma faixa de quantidade de modelo de 7 ordens de magnitude, alcançando boa linearidade dentro de uma ampla faixa linear.

Figura2. Pode distinguir com precisão diferenças de concentração de modelo de 2 vezes.

Usando 2 µL de plasmídeo diluído em um gradiente de 2 vezes como molde, os genes relacionados foram amplificados. Hieff UNICON™ O master mix do ColorGPS pode resolver com precisão as diferenças de concentração do modelo.

Figura3. Pequena variabilidade entre poços é observada, mostrando melhor repetibilidade.

Usando dezenas de cópias do plasmídeo como molde, a amplificação foi realizada com diferentes reagentes quantitativos fluorescentes de acordo com os procedimentos especificados em seus respectivos manuais de instruções. Os valores de DP indicam que, comparado a outros reagentes de transcrição reversa, o novo produto tem diferenças menores entre poços replicados e melhor repetibilidade.

Figura4. Mais flexível, adequado para procedimentos padrão ou rápidos.

No procedimento padrão, o tempo de desnaturação e o tempo de extensão são definidos para 10 segundos e 30 segundos, respectivamente, enquanto no procedimento rápido, o tempo de desnaturação e o tempo de extensão são definidos para 3 segundos e 10 segundos, respectivamente, para detectar os valores de Ct correspondentes a 10 genes alvo. Os resultados mostram que os valores de Ct obtidos com o novo produto em procedimentos padrão e rápido têm uma forte correlação, e o novo produto pode atingir bons resultados usando o procedimento rápido.

Figura5. Após o sistema de reação ser preparado, ele pode permanecer estável em temperatura ambiente por 24 horas.

Usando diferentes genes de camundongo, células 293 humanas e Arabidopsis thaliana como alvos, após preparar o sistema de reação, ele foi colocado no escuro em diferentes temperaturas por 24 horas antes da detecção. Comparado ao processamento imediato, a diferença de detecção para diferentes genes não excede 0,5 Ct, indicando que resultados estáveis ​​também podem ser obtidos com operações de longa duração.

Documentos:

Manuais

11189_Manual_Ver.EN20241218.pdf

Storage

This product should be stored at -25~-15℃ for 18 months.

FAQ

Please refer to the "YiSheng Biotechnology YiSheng Biotechnology Dye Method Fluorescence Quantitative PCR Mix Selection Table" for details. Click here to learn more and help you choose the appropriate reagents.
For molecular enzyme reagents, simply invert and mix them together, then perform a gentle centrifugation. It is not recommended to vigorously shake to mix them.
Refer to the manual. Ultimately, it is necessary to ensure that after being mixed with the template, the volume is exactly 1×. For example, for 20 μL of cDNA stock solution, add 180 μL of sterile ultrapure water to dilute it 10 times, resulting in 200 μL of diluted template. Take 90 μL of the diluted template and add 10 μL of 10× Dilution Buffer, mix well, and then use it. You can choose not to do this, but it will not affect the result.
You can choose to use the cDNA stock solution or dilute it. Just make sure that the Ct value of the gene you want falls within the range of 15 to 30. Generally, for every 10-fold dilution of cDNA, the Ct value increases by 3.3.
Store in a dark place and the reaction system must not be left open. These two points are essential. It can be placed in a 4℃ refrigerator or at room temperature for 24 hours. Before using, gently shake and centrifuge the sample before loading it onto the instrument. Before loading, carefully check if the tubes or plates have been contaminated.
https://cdn.shopify.com/s/files/1/0803/9419/1166/files/bbbb_1024x1024.png?v=1769394213 When designing primers, it is best to cross introns. The design method can refer to "Enjoyable! A single article to understand qPCR primer design, a must-have skill for experimental experts!" Also, validated primers can be selected. The selection method can refer to "Where to find ready-made qPCR primer sequences?"
The possible reasons are as follows:
1. The instrument has not been calibrated for a long time or it is aging. Usually, the instrument needs to be calibrated once a year. It is necessary to have an instrument engineer perform the calibration or replace the aging components.
2. A 10 μL reaction system was used. The normal system is a 20 μL system. Using half of the normal system would result in an excessively low total concentration of Rox, increasing the probability of BadRox occurrence. It is recommended to conduct the experiment using the 20 μL system.
The specificity of qPCR products can usually be determined through the melting curve. If it is still necessary to determine the products through gel electrophoresis, the qPCR product can undergo electrophoresis. Electrophoresis requires Loading Buffer, and the product cannot be directly loaded for electrophoresis.
1. Confirm whether the signal acquisition function is enabled in the program. If a two-step method is used, the signal acquisition should be set during the annealing extension stage.
2.Is the length of the product too long? If the length of the product is set to 500bp or more, this situation may occur. It is recommended that during primer design, the length of the product be controlled within the range of 80-300bp.
3. Are the primers inappropriate? If the primers are not designed correctly, they need to be redesigned. If the primers are correctly designed but seem to be degraded, PAGE electrophoresis can be used to check the integrity of the primers.
4. Template degradation: Prepare the template anew and repeat the experiment.
The analysis is conducted by observing the melting curve. The melting curve shows that the melting peak shape of NTC does not overlap with that of the corresponding gene, and the TM value of NTC is smaller than that of the corresponding gene. In this case, the product corresponding to NTC is a primer dimer. If the melting curve peak shape of the corresponding gene is a single peak, the collection of the signal of the related gene will not be affected. The melting curve shows that the melting peak shape of NTC overlaps with that of the corresponding gene. In this case, the product corresponding to NTC is likely to be the product of the corresponding gene. The system has been contaminated. We need to check one by one whether the water, primers, or reagents have been contaminated. If none of them have been contaminated, it might be aerosol contamination. Based on the obtained amplification data, the ΔCT value is calculated to determine whether the contamination has a significant impact on the system. If ΔCT ≥ 5, it indicates that the contamination has a minor effect and can be ignored.
It indicates the presence of genomic DNA contamination. It is recommended to use an RNA extraction kit that removes the genome for RNA extraction or during reverse transcription by adding a step to remove the genome. Alternatively, when designing the primers, a design across introns should be adopted.
1. If the CT value is less than 30, but the repeatability is very poor, what should we do? Improve the accuracy of sample addition. Avoid adding small volumes and reduce the error of addition. This can be achieved by preparing a large sample system, for example, mixing primers, water, and qPCR mix into a large system or using the method of mixing primers and water into a large system. The large system needs to be mixed evenly. Improve the accuracy of the pipette's aspiration. Pipettes usually need to be calibrated regularly, once a year.
2. What if CT is ≥ 30 but the repeatability is very poor? At this point, due to the low abundance of the effective template, the randomness of collisions between the template and the primers increases, thereby causing a greater difference between the replicons. It is recommended to try adding 2-3 replicons, and then eliminate the data with large differences for data analysis.
The overlapping peaks in the melting curve are located to the left of the main peak. This might be a situation caused by primer dimerization. One possible solution could be to increase the annealing temperature, reduce the primer concentration, or redesign the primers. The overlapping peaks in the melting curve are located to the right of the main peak. a. It is possible that the non-specific amplification occurred due to poor specificity of the primers. The primers need to be redesigned. b. It is possible that the template DNA was contaminated with genomic DNA. It is recommended to use an RNA extraction kit that removes the genomic DNA for RNA extraction, or to add a step of removing the genomic DNA during reverse transcription to reprepare the cDNA template.

Citations

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