Hifair™ O kit de síntese de cDNA AdvanceFast 1st Strand (sem corante) é um kit de transcrição reversa rápida desenvolvido com base no Hifair™ III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (sem corante), adequado para amplificação por PCR e experimentos de RT-qPCR. Comparado com o Hifair™ Kit de síntese de cDNA de 1ª fita III (sem corante), apresenta taxas de detecção estáveis, especificidade e garantia de rendimento, com o tempo total de transcrição reversa potencialmente reduzido para menos de 6 minutos, encurtando significativamente a duração experimental.
O kit inclui gDNA Digester Mix, que pode eliminar a contaminação do DNA genômico restante no molde de RNA, garantindo resultados subsequentes mais confiáveis. O kit fornece dois tipos de primers de síntese de cDNA: Random Primers N6 e Oligo (dT)18. Os usuários podem escolher entre Random Primers N6, Oligo (dT)18, ou Gene Specific Primers como primers de transcrição reversa de acordo com suas necessidades. O produto de cDNA de fita simples sintetizado pode ser usado diretamente para reações de PCR ou qPCR subsequentes.
Especificações
| Cat.No. | 11150ES10 / 11150ES60 |
| Tamanho | 10 toneladas/100 toneladas |
Componentes
| Componentes No. | Nome | 11150ES10 | 11150ES60 |
| 11150-A | 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix (sem corante) | 50 μL | 500 μL |
| 11150-B | Mistura para Digestor 5×gDNA | 20 μL | 200 μL |
| 11150-C | Primers aleatórios (50 μmol/L) | 20 μL | 200 μL |
| 11150-D | Oligo d(T)18 Primers (50 μmol/L) | 20 μL | 200 μL |
| 11150-E | Água sem RNase | 200 μL | 2×1 mL |
Armazenar
Este produto deve ser armazenado a -25~-15℃ por 1 ano.
Instruções
- Se o experimento exigir a remoção de DNA genômico residual
1）Digestão de gDNA
Em um tubo de centrífuga livre de RNase, prepare a seguinte mistura e pipete suavemente para misturar bem. Incube a 42℃ por 2 minutos.
| Componentes | Volume (μL) |
| Água sem RNase | Para 10 μL |
| Mistura para Digestor de 5× gDNA | 2 μL |
| RNA total* | 10 pg-5 μg |
| ou mRNA* | 10 pg-500 ng |
* É recomendado que a quantidade de entrada de RNA Total não exceda 2 μg. Se o nível de expressão do gene alvo for baixo, a quantidade de entrada pode ser aumentada para um máximo de 5 μg de RNA Total.
2）Preparação do sistema de reação de transcrição reversa (sistema de 20 μL)
| Componentes | Volume (μL) |
| a solução de reação da etapa anterior | 10 μL |
| 4×Hifair™AdvanceFast SuperMix (sem corante) | 5 μL |
| Oligo d(T)18 Primários (50 μmol/L)** | 2 μL |
| ou Primers Aleatórios (* para qPCR) (50 μmol/L)** | ou 2 μL |
| Água sem RNase | Para 20 μL |
* A quantidade de primers pode ser ajustada de acordo com a quantidade de entrada de template. Se o produto de transcrição reversa for usado para experimentos de qPCR, Random Primers podem ser adicionados no sistema de acordo com a quantidade recomendada.
** Recomenda-se primeiro adicionar 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix (sem corante), misturar bem e, em seguida, adicionar o primer de transcrição reversa para garantir que o primer não seja afetado pelo gDNA Digester.
3）Configurações do procedimento de transcrição reversa
| Temperatura. | Tempo |
| 55℃* | 5 minutos** |
| 85℃ | 5 segundos |
* Para modelos com alto conteúdo de GC ou modelos complexos, a temperatura de transcrição reversa pode ser aumentada para 60℃.
** Este produto pode sintetizar sequências de cDNA abaixo de 14 kb. Se você precisar de produtos de cDNA mais longos, você pode estender apropriadamente o tempo de transcrição reversa.
- Se o experimento não exigir a remoção do DNA genômico
1）Preparação do sistema de reação de transcrição reversa (sistema de 20 μL)
| Componentes | Volume (μL) |
| 4×Hifair™AdvanceFast SuperMix (sem corante) | 5 μL |
| Oligo d(T)18 Primários (50 μmol/L)** | 2 μL |
| ou Primers Aleatórios (* para qPCR) (50 μmol/L)** | ou 2 μL |
| RNA total* | 10 pg -5 μg |
| ou mRNA | 10 pg - 500 ng |
| Água sem RNase | Para 20 μL |
* É recomendado que a quantidade de entrada de RNA Total não exceda 2 μg. Se o nível de expressão do gene alvo for baixo, a quantidade de entrada pode ser aumentada para um máximo de 5 μg de RNA Total.
** A quantidade de primers pode ser ajustada de acordo com a quantidade de entrada de template. Se o produto de transcrição reversa for usado para experimentos de qPCR, Random Primers podem ser adicionados no sistema de acordo com a quantidade recomendada.
2）Configurações do procedimento de transcrição reversa
| Temperatura. | Tempo |
| 55℃* | 5 minutos** |
| 85℃ | 5 segundos |
* Para modelos com alto conteúdo de GC ou modelos complexos, a temperatura de transcrição reversa pode ser aumentada para 60℃.
** Este produto pode sintetizar sequências de cDNA abaixo de 14 kb. Se você precisar de produtos de cDNA mais longos, você pode estender apropriadamente o tempo de transcrição reversa.
Notas
- Todas as operações devem ser realizadas no gelo e de maneira a evitar contaminação por RNase.
- Este produto é somente para uso em pesquisa.
- Por favor, opere com jalecos e luvas descartáveis, para sua segurança.
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