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MicroRNAs são uma classe de RNAs não codificantes com um comprimento de cerca de 22 nt, que desempenham um papel importante na regulação da expressão gênica em plantas e animais. Este kit usa o método Poly(A)-tailing para realizar a transcrição reversa da primeira fita do miRNA para o cDNA. O tampão 2×Hifair™ miRNA RT no produto contém todas as matérias-primas e primers para a reação de Poly(A)-tailing do miRNA e a reação de transcrição reversa. A otimização cuidadosa garante que o processo de modificação do Poly(A) e o processo de transcrição reversa possam ser realizados simultaneamente e eficientemente na extremidade 3' do miRNA.
Este produto é recomendado para ser usado em conjunto com o Hieff™ miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix (Cat#11171) da nossa empresa para resultados experimentais ideais.
Características
- Alta taxa de detecção de sensibilidade: 10 pg de RNA podem ser detectados
- Alta estabilidade do produto: permanece inalterado a 37℃ por 7 dias
Aplicativo
- O cDNA de primeira fita é sintetizado e pode ser usado como um molde parar RT-PCR e RT-qPCR em tempo real.
Especificações
| Final produto tipo | cDNA (primeira fita) |
| Método PCR | RT-PCR |
| Formato de reação | Fração isolada |
| Tipo de amostra | miRNA |
| Temperatura de reação ótima | 37℃ |
| Reverter transcriptase | MLLV |
Componentes
| Componentes No. | Nome | 11148ES50 (50T) |
| 11148-A | Hifair™ Mistura de enzimas RT de miRNA | 87,5 μL |
| 11148-B | 2×Hifair™ Tampão RT de miRNA | 250 μL |
| 11148-C | H livre de RNase2O | 10 mL |
| 11148-D | Primer reverso universal (10 μmol/L) | 4 mL |
| 11148-E | Primer U6 para frente (10 μmol/L) | 500 μL |
| 11148-F | Primer reverso U6 (10 μmol/L) | 500 μL |
Armazenar
O produto deve ser armazenado a -25°C~-15℃ por 1 ano.
Figuras
Figura 1. Taxa de detecção de alta sensibilidade: 10 pg de RNA puderam ser detectados.
O hsa-miR-let-7e-5p sintetizado (a) e o RNA total de células 293T (b) foram usados como moldes e diluídos nos seguintes gradientes: 60 cópias para 606 cópias (6 gradientes) e 10 pg-100 ng (5 gradientes). Todo o cDNA do gradiente foi detectado.
[1] Huang G, Chen J, Liu J, Zhang X, Duan H, Fang Q. O loop de feedback MiR-935/HIF1α inibe a proliferação e a invasão do glioma. Onco Targets Ther. 2020;13:10817-10828. Publicado em 23 de outubro de 2020. doi:10.2147/OTT.S244409(IF:4.147)
[2] Li H, Pan R, Lu Q, et al. MicroRNA‑145‑5p inibe células de osteossarcoma proliferação por direcionamento do fator de transcrição E2F 3. Int J Mol Med. 2020;45(5):1317-1326. doi:10.3892/ijmm.2020.4504(IF:4.101)
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