Este produto é uma RNA polimerase T7 de bacteriófago derivada da expressão de proteína recombinante em Escherichia coli. Ele catalisa a síntese 5'→3' de RNA em DNA fita dupla a partir de sua sequência promotora T7 (5'-TAATACGACTCACTATAG*-3') e usa NTPs como substratos. O DNA com extremidades rombas lineares fita dupla ou extremidades salientes 5' pode ser usado como moldes para RNA polimerase T7, então plasmídeos linearizados e produtos de PCR podem ser usados como moldes para in vitro síntese de RNA.
Nota: G* é a primeira base do transcrito de RNA.
Este produto é produzido de acordo com os regulamentos GMP e fornecido na forma líquida.
Recurso
- Sintetizar transcrições longas e transcrições curtas, o RNA pode ser produzido 100-200 μg com 1 μg de molde de DNA
- Maior rendimento e fácil de operar
- Endotoxinas mais baixas
- Testado para ausência de endonucleases, exonucleases, RNases
Aplicativo
- Preparação da sonda de RNA radiomarcada
- Geração de RNA para estudos de estrutura, processamento e catálise de RNA
- Controle de expressão via RNA anti-sentido
- síntese de mRNA, sgRNA
Especificação
| Fonte | Expresso em E. coli com um gene recombinante T7 RNA Polimerase |
| Temperatura Ótima | 37℃ |
| Buffer de armazenamento | 50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0,1% Triton X-100, 50% (v/v) glicerina, pH 7,9 em 25℃ |
| Definição de unidade | A quantidade de enzima necessária para incorporar 1 nmol de [3H] GMP no precipitado insolúvel em ácido em 1 hora a 37°C e pH 8,0 é definido como 1 unidade. |
Qualidade
| Itens do COA | Padrão |
| Atividade | 250-300U/μL |
| Proteína concentração | ≥0,5mg/mL |
| Pureza | ≥95% |
| Endotoxina | <20 UE/mg |
| Protease residual | Negativo |
| Exonuclease residual | Negativo |
| Níquel residual | Negativo |
| RNase residual | Negativo |
| E. proteína hospedeira coli | <50 ppm |
| Hospedeiro de E. coli ADN | <10 fg/U |
| Micoplasma ADN | Negativo |
Componentes
| Componentes No. | Nome | 10625ES10 (10 KU) | 10625ES60 (100 KU) | 10625ES86 (2.500 KU) | 10625ES99 (100 UM) |
| 10625 | T7 RNA polimerase grau GMP (250 U/μL) | 40 μL | 400 μL | 10 mL | 400 mL |
Envio e armazenamento
Os produtos de grau GMP da T7 RNA Polimerase são enviados com gelo seco e podem ser armazenados a -15℃ ~ -25℃ por um ano.
Figuras
Figura 1. O RNA padrão foi sintetizado in vitro usando o kit de síntese de RNA T7.
A reação foi incubada em instrumento de PCR a 37℃ por 2h, e então purificada por esferas magnéticas (Cat#12602). O resultado do rendimento foi analisado pelo espectrofotômetro NanoDrop, conforme mostrado na Figura 1.
Figuras 2. Demonstração da transcrição de RNA de diferentes comprimentos pelo kit T7, respectivamente no eletroforetograma (Figuras 2A), no diagrama de eletroforese capilar (Figuras 2B) e no cromatograma (Figuras 2C)
Figura 3. Síntese de RNA encapsulado in vitro.
A reação foi incubada em instrumento de PCR a 37℃ por 2h e então purificada por esferas magnéticas (Cat#12602). O resultado do rendimento foi analisado pelo espectrofotômetro NanoDrop, conforme mostrado na Figura 3A. O resultado da integridade foi analisado por eletroforese capilar, conforme mostrado na Figura 3B.
10625_Manual_HB221111_PT.pdf
Citações e referências:
Storage
FAQ
1)ptimizing the sequence immediately upstream of the template's 3' end;
2)Controlling the IVT yield, as excessively high transcription levels tend to increase the frequency of self-extension events.
Citations
Documents
Você também pode gostar
Investigação
Perguntas frequentes
O produto é apenas para fins de pesquisa e não se destina ao uso terapêutico ou diagnóstico em humanos ou animais. Os produtos e o conteúdo são protegidos por patentes, marcas registradas e direitos autorais de propriedade da
Certos aplicativos podem exigir direitos adicionais de propriedade intelectual de terceiros.