図1. 宿主細胞に付着したマイコプラズマの電子顕微鏡写真
マイコプラズマ汚染の背景と危険性
マイコプラズマは、球状、桿状、糸状など様々な形態をとる、既知の原核生物の中で最も小さく単純な生物です。細胞壁を持たず、直径は通常0.1～0.3μmで、標準的な濾過膜（0.22～0.45μm）を通過できます。
細胞培養における汚染物質として、20種を超えるマイコプラズマが確認されており、汚染事例の95%以上はMycoplasma orale 、 Mycoplasma arginini 、 Mycoplasma fermentans 、 Acholeplasma laidlawii 、 Mycoplasma hominis 、およびMycoplasma hyorhinisによるものです。文献によると、保管細胞株におけるマイコプラズマ汚染の発生率は15%～35%、バイオ医薬品業界では0.44%～6.70%です。国内外の薬局方および規制ガイドラインでは、細胞形態の変化、成長阻害、代謝阻害、細胞増殖障害などの有害作用のため、マイコプラズマ汚染は重要な微生物学的品質管理項目に分類されています。
図2. 宿主細胞を取り囲んで感染するマイコプラズマ（オレンジ色）は、遺伝子発現研究の妥当性を損なう可能性がある。
1. 実験室におけるマイコプラズマ汚染の主な経路は何ですか?
汚染源は、大きく分けて 5 つの種類に分類できます。
A.環境汚染: 例: 細胞培養室、インキュベーター、またはバイオセーフティキャビネット内にすでにマイコプラズマが存在する。
B.汚染された実験器具: 例: ピペット、ピペットチップ、培養皿、ウォーターバス。
C.汚染された培養試薬: 例:培地、トリプシン、血清、凍結保存溶液。
D.汚染された一次細胞。
E.研究室職員による不適切な取り扱い。
2. マイコプラズマ汚染は細胞にどのような影響を与えますか?
マイコプラズマに汚染された細胞は次のような特徴を示すことがあります。
透明な培養上清
成長と増殖の鈍化
糸状または広範囲に広がった細胞などの異常な形態
培地の変更やFBS濃度の増加に反応しない
3. 実験室でマイコプラズマを検出するための一般的な方法は何ですか?
検出方法には次のものがあります:
文化に基づく方法
インサイチュー染色
化学発光アッセイ
ネストPCR
特異的プローブを用いたqPCR
等温増幅および比色分析
これらの中には、 培養に基づく検出は、国内および海外のマイコプラズマ検査におけるゴールドスタンダードであり続けています。
4. マイコプラズマを除去する方法は何ですか?
除去戦略の選択はサンプルの種類によって異なります。
生物学的製品: 最適な方法はオートクレーブ処理してから廃棄することです。
腫瘍細胞またはハイブリドーマ細胞: これらを同系動物モデルに接種し(例: ヌードマウスの皮下または腹腔内)、宿主の免疫系を利用してマイコプラズマを除去し、その後目的の細胞を採取してマクロファージを除去します。
貴重な細胞株: オートクレーブ処理が不可能な場合は、培養物にマイコプラズマ除去試薬 (抗生物質ベースまたは非抗生物質ベース) を添加できます。
実験室環境: 培養室の定期的な消毒、細胞培養の標準化された SOP の遵守、マイコプラズマが含まれていないことが証明された試薬と消耗品の厳格な選択が推奨されます。
5. 一般的なマイコプラズマ除去試薬のメカニズムは何ですか?
マイコプラズマ除去戦略は、通常、次の 3 つのカテゴリに分類されます。
A. DNA合成阻害剤
例：フルオロキノロン系抗生物質
メカニズム：DNA複製を阻害する
注：単一の抗生物質を長期使用すると耐性が生じる可能性があります。効果が低下した場合は、別の抗生物質に切り替えるか、併用療法を使用してください。
B. タンパク質合成阻害剤
例：マクロライド、テトラサイクリン、ジテルペン
メカニズム：マイコプラズマにおけるタンパク質生合成を阻害する
注意: 単独療法でも耐性が生じる可能性があります。薬剤の交代や複合抗生物質製剤の使用が推奨されます。
C. 非抗生物質試薬
例：膜活性ペプチド
メカニズム：マイコプラズマ膜に特異的に結合して破壊し、完全な除菌に導く
利点: 耐性発現のリスクがなく、除去効率はほぼ 100% で、宿主細胞に対する細胞毒性は最小限です。
製品概要
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製品名 |
仕様 |
カタログ番号 |
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1mL/5mL |
40608ES03/08 |
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10アッセイ/20アッセイ |
40601ES10/20 |
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100μL/1mL/5×1mL |
40607ES01/03/08 |
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25トン/100トン |
40612ES25/60 |
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25トン/100トン |
40619ES25/60 |