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A protease SUMO reconhece a proteína completa do rótulo SUMO (Small Ubiquitin-like Modifier) com 100 aminoácidos e corta eficientemente o SUMO da proteína de fusão. Comparada com os locais de reconhecimento de EK e TEV, a protease SUMO tem alta especificidade devido à sua longa sequência de reconhecimento e mantém alta atividade em uma ampla gama de sistemas ambientais de reação, como temperatura (4-30℃), pH (5,5-9,5), etc. A protease SUMO também tem um rótulo His polimerizado, que é conveniente para remover a protease SUMO e purificar a proteína alvo por cromatografia de afinidade.
Especificações
| Cat.No. | 20410ES60 / 20410ES70 / 20410ES80 |
| Tamanho | 100 U / 500 U / 1000 U |
| Atividade enzimática | 1 U/μL |
| Unidade Definição | A quantidade de enzima necessária para corte >85% do substrato de 3 μg em um tampão 1×rTEV (50 mM Tris, pH 8,0, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT) a 30℃ por 1 h foi definido como uma unidade de atividade |
| Fonte | Expresso em E. coli |
| Rótulo | Polimerizou seu rótulo |
| Pureza da proteína | > 90% |
| Peso molecular | 26,55 kDa |
| Armazenar Tampão | 25 mM Tris-HCl, pH 8,0、0,1% Igepal (NP-40)、250 mM de NaCl、500 μM TDT、50% glicerina |
Componentes
Observação：A definição da atividade enzimática usa 10×Protease Buffer (-sal). A protease SUMO tem atividade relativamente alta em 10×Tampão de protease (-sal), mas para substratos instáveis, 10×Protease Buffer (+sal) deve ser selecionado. Também fornecemos tampão de reação 20410-B2 com +sal.Escolha o buffer correto para seu experimento. 20410-B2：500 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2% Igepal (NP-40), 1,5 M de NaCl, 10 mM de TDT；20410-B1：500 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2% Igepal (NP-40), 10 mM de DTT. | ||||||||||||||||||||
Armazenar
Este produto deve ser armazenado em -85~-65℃ por 1 ano.
Instruções
- O seguinte sistema de reação é formulado no tubo EP:
- Incubar a 30℃, sugar 20 μL da solução de reação acima em 1, 2, 4 e 6 horas em um tubo EP separado respectivamente.
- Adicionar 20 μL de 2×SDS carregando o tampão no tubo EP e colocando-o a -20℃.
- Após a reação de todas as amostras ser concluída, as amostras foram fervidas por 5 min e 30 μL foram retirados para análise SDS-PAGE. Determine o tempo de resposta ótimo.
| Componentes | Volume (μL) (O sistema de reação pode ser reduzido igualmente) |
| Proteína de fusão | 50 mcg |
| 10×Tampão de protease | 20 μL |
| Protease SUMO (1U/μL) | 10 μL |
| ddH2O | para 200 μL |
Observação: Se a proteína de fusão exigir tratamento em baixa temperatura, a solução de reação pode ser colocada a 4℃ para prolongar o tempo de reação e aumentar a quantidade de enzima SUMO para garantir o efeito da digestão enzimática.
Mesa 1. Sumô Protease atividade de digestão em diferentes temperaturas
| Incubação Tempo（o） | Atividade de digestão em diferentes temperaturas (%) | |||
| 4℃ | 16℃ | 25°C | 30℃ | |
| 0,5 | 48 | 73 | 83 | 88 |
| 1 | 60 | 87 | 90 | 93 |
| 2 | 71 | 94 | 94 | 95 |
| 3 | 74 | 95 | 95 | 95 |
Notas
1. Use o EPI necessário, como jaleco e luvas, para garantir sua saúde e segurança.
2. Este produto é somente para uso em pesquisa.
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