Hieff NGS^TM UCF.EU As esferas de seleção de DNA são preparadas com base no princípio SPRI (Imobilização Reversa em Fase Sólida) e é aplicável para purificação de DNA e seleção de tamanho durante a preparação de bibliotecas de sequenciamento de próxima geração (NGS). Hieff NGS^TM UCF.EU As esferas de seleção de DNA são compatíveis com vários kits de preparação de bibliotecas de DNA e RNA. Este produto é fabricado em uma instalação ultralimpa com alto nível de limpeza e pode ser usado para a etapa de purificação de DNA durante processos de detecção de patógenos.

Especificações

Componentes

Armazenar

Este produto deve ser armazenado em 2~8℃ por 18 meses.

Envio e armazenamento

As contas são enviadas com bolsas de gelo e podem ser armazenadas entre 2°C e 8°C por um ano.

Instruções

• 1. Preparação

Equilibre as esferas de seleção em temperatura ambiente por pelo menos 30 minutos antes de usar.

• 2. Seleção do tamanho do DNA

O fluxo de operação de seleção de tamanho é mostrado na Figura 1 e o protocolo é o seguinte.

Figura 1. Fluxograma de seleção do tamanho do DNA

2.1 Misture bem as contas agitando ou pipetando para cima e para baixo sempre antes de usar.
2.2 Adicione a primeira rodada de esferas de seleção à amostra (consulte a Tabela 1). Misture bem agitando ou pipetando para cima e para baixo pelo menos 10 vezes.
2.3 Incube em temperatura ambiente por 5 min.
2.4 Centrifugue o tubo brevemente e coloque-o no suporte magnético. Quando a solução estiver límpida (cerca de 5 min), transfira o sobrenadante para um novo tubo de PCR.
2.5 Adicione a segunda rodada de esferas de seleção à amostra da etapa 2.4 de acordo com a Tabela 1. Misture bem agitando ou pipetando para cima e para baixo pelo menos 10 vezes.
2.6 Incube em temperatura ambiente por 5 min.
2.7 Centrifugue o tubo brevemente e coloque-o no suporte magnético. Quando a solução estiver límpida (cerca de 5 min), aspire o sobrenadante e descarte.
2.8 Mantenha o tubo no suporte magnético e adicione 200 μL de etanol 80% recém-preparado sem perturbar as esferas, incubar em temperatura ambiente por 30 seg. Aspire o etanol e descarte.
2.9 Repita a etapa 2.8 uma vez para um total de duas lavagens.
2.10 Remova o etanol residual com pontas de pipeta de 10 µL. Mantenha o tubo no suporte magnético, seque as esferas de seleção ao ar com a tampa aberta até que as rachaduras apareçam (cerca de 5 min).
Observação: não seque demais as esferas de seleção. Isso pode resultar em menor recuperação do DNA alvo.
2.11 Remova o tubo do suporte magnético. Adicione uma quantidade apropriada de ddH2O (≥20 µL) e misture bem agitando ou pipetando para cima e para baixo pelo menos 10 vezes.
2.12 Incube em temperatura ambiente por 5 min.
Gire o tubo brevemente e coloque-o no suporte magnético. Quando a solução estiver límpida (cerca de 5 minutos), transfira 20 μL do sobrenadante para um novo tubo.

• 3. Condições recomendadas para seleção do tamanho do DNA

O DNA do timo do bezerro foi fragmentado por sonicação para preparar um fragmento de 100-1.000 pb, e duas rodadas de seleção de tamanho foram realizadas de acordo com a Tabela 1. Os resultados foram analisados ​​usando o Agilent 2100 Bioanalyzer (Figura 2).

Tabela 1. Condição recomendada para seleção do tamanho do DNA

Nota: "×" na tabela indica o volume do DNA da amostra. Por exemplo, se o comprimento de inserção da biblioteca for 250 pb e o volume do DNA da amostra for 100 μL, o volume de esferas magnéticas usadas na primeira rodada de classificação será 0,80×100 μL=80 μL; o volume de esferas magnéticas usadas na segunda rodada de classificação será 0,20×100 μL=20 μL.

Figura 2. Eletroferograma do chip de DNA de alta sensibilidade Agilent 2100