A nuclease AapCas12b (também conhecida como C2c1) é uma endonuclease de DNA mediada por tracrRNA:crRNA (ou sgRNA), derivada da bactéria termofílica Aliciclobacillus acidophilus. Na presença de uma sequência PAM (TTN) no DNA fita dupla alvo (dsDNA), ele cliva especificamente o dsDNA alvo, causando quebras de fita dupla e gerando extremidades pegajosas. AapCas12b pode clivar especificamente alvos de DNA fita simples independentemente da sequência PAM. Alvos de DNA fita dupla e fita simples podem ativar a atividade de clivagem trans de AapCas12b. Quando a enzima AapCas12b forma um complexo ternário com sgRNA e DNA alvo, ela se torna ativada para atividade de clivagem trans de ssDNA não específica, cortando qualquer sequência arbitrária de ssDNA no sistema. A temperatura ótima de reação de clivagem para AapCas12b é 60oC, o que o torna mais resistente ao calor do que o AacCas12b e mais adequado para uso com LAMP para desenvolver sistemas de amplificação isotérmica/detecção CRISPR-Cas.
Características
Ampla faixa de temperatura de reação: Exibe atividade de clivagem dentro da faixa de temperatura de 37~65oC
Baixo resíduo de nuclease: Nenhuma exonuclease, nickase ou RNase residual
Atividade de clivagem cis: Clivagem altamente eficaz de DNA de fita dupla in vitro
Atividade de trans-clivagem: Alta atividade de trans-clivagem, adequada para detecção de ácido nucleico
Aplicações
Edição de genes CRISPR/Cas
Diagnóstico e detecção com base no sistema CRISPR/Cas
Outras aplicações de detecção combinadas com tecnologias de amplificação isotérmica de ácidos nucleicos (RPA e LAMP), etc.
Especificações
| Peso molecular | 130 KDa |
| Concentração | 10 µM |
| Pureza | >95% (PÁGINA SDS) |
| Definição de unidade | A quantidade de enzima Cas12b necessária para clivar 1 pmol de sonda ssDNA em 1 minuto a 60oC em um volume total de reação de 20 µL, contendo 1×tampão de reação, é definido como 1 U |
Componentes
| Componentes Não. | Nome | 14808ES65 | 14808ES80 |
| 14808-A | Nuclease AapCas12b (10 μM) | 100 μL | |
| 14808-B | 10×Tampão de reação | 1 mL | 1 mL |
Enviarping e armazenamento
Este produto deve ser armazenado a -25 ~ -15oC por 2 anos.
Figuras
Figura 1. Verificação da atividade de clivagem cis da nuclease AapCas12b
Observação: Em um 20 µSistema de reação L contendo dsDNA alvo com uma sequência PAM, sgRNA, Cas12b e 1×tampão de reação, a mistura foi incubada a 60oC por 30 minutos e depois inativado a 85oC por 5 minutos. Os resultados da eletroforese em gel de agarose mostraram que três lotes de AapCas12b Nuclease foram todos capazes de clivar efetivamente o dsDNA, com eficiência de clivagem comparável à da marca importada T*.
Figura 2. Resultados do teste de atividade de transclivagem da nuclease AapCas12b
Observação: Em um 20 µSistema de reação L contendo dsDNA alvo com uma sequência PAM, sgRNA, Cas12b, sonda fluorescente ssDNA Report e 1×tampão de reação, a mistura foi incubada a 60oC por 1 hora, e o sinal de fluorescência foi coletado a cada 30 segundos. Os resultados mostraram que na presença de Target DNA, sgRNA e Cas12b juntos, a sonda fluorescente Report ssDNA poderia ser clivada, liberando assim o sinal de fluorescência.
Documentos:
Ficha de dados de segurança
14808_FISPQ_Ver.EN20241209.pdf
Manuais
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