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Ribonuclease R (RNase R) de E. coli, é uma exoribonuclease 3′→5′ dependente de magnésio que pode digere todos os RNAs lineares, mas não digere estruturas de RNA lariat ou circular. A maioria dos RNAs celulares será digerida completamente pela RNase R, com exceção de tRNAs, RNA 5S e lariats de íntron. A RNase R é usada para enriquecimento de circRNAs em amostras biológicas, identificação de sequências de lariat intrônicas, identificação de circRNAs exônicos, estudo de splicing alternativo.
Características
Eficácia e qualidade garantidas com certificação ISO 13485.
Disponível em grandes quantidades ou em configurações personalizadas.
Decompõe efetivamente o RNA linear, preservando os laços de ligação e os RNAs circulares.
A digestão seletiva de RNAs lineares melhora o isolamento de RNAs circulares para produção de proteínas ou construção de biblioteca de cDNA intrônica.
Oferecendo RNAse R de grau GMP (14615)
Especificações
| Fonte | Um recombinante E. coli estirpe portadora do gene RNAse R de E. coli |
| Temperatura Ótima | 37℃ |
| Buffer de armazenamento | 50 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 0,1 mM de EDTA, 0,1% Triton® X-100, 1 mM de DTT, 50% glicerol, pH 7,5 em 25℃ |
| Definição de unidade | Uma unidade converte 1 μg de poli-r(A) em nucleotídeos solúveis em ácido em 10 minutos a 37°C em 20 mM Tris-HCl (pH 8,0), 100 mM KCl e 0,1 mM MgCl2. |
Aplicativo
RNase R serve como um componente fundamental na síntese de RNA circular (circRNA). CircRNA promete melhorar a estabilidade farmacêutica e a bioestabilidade. Com suas estruturas covalentemente fechadas, circRNAs resistem a exonucleases de RNA. [1,2] RNase R encontra ampla aplicação em vários estudos, incluindo splicing alternativo, produção de cDNA de íntron e isolamento de intermediários de splicing e lariats.
Componentes
| Componentes No. | Nome | 14606ES72 | 14606ES86 | 14606ES92 |
| 14606-A | RNase R (20 U/μL) | 12,5 μL | 125 μL | 500 μL |
| 14606-B | Tampão de reação 10×RNase R | 250 μL | 3 × 1 mL | 10 mL |
Armazenar
Este produto deve ser armazenado entre -25 e -15℃ por 2 anos.
Instruções
Prepare o seguinte sistema de reação em um tubo de microcentrífuga estéril
| componente | Volume |
| Tampão de reação 10×RNase R | 2 μL |
| Amostra de RNA | 1 micrograma |
| RNase R (20 U/μL) | 2-4 você |
| ddH livre de RNase2O | Até 20 μL |
Incube a 37 ℃ por 10 - 30 minutos.
Figuras
Figura 1: Moléculas de RNA linear podem ser digeridas pela Yeasen RNAse R.
Figura 2: CircRNA não pode ser digerido pela Yeasen RNAse R.
Notas
- A atividade da RNase R requer 0,1-1,0 mM Mg2+;
- Com o aumento do RNA, o tempo de reação pode ser estendido e a quantidade de enzima pode ser aumentada adequadamente;
- O conteúdo de EDTA em amostras de RNA pode afetar a atividade da RNase R.
- Incubar a 70 ℃ por 10 minutos pode inativar a enzima.
Referência
- Qu L, Yi Z, Shen Y, et al. Vacinas circulares de RNA contra SARS-CoV-2 e variantes emergentes. Célula. 2022;185(10):1728-1744.e16. doi:10.1016/j.cell.2022.03.044
- Chen L, Wang C, Sun H, et al. A caixa de ferramentas de bioinformática para descoberta e análise de circRNA. Breve Bioinform. 2021;22(2):1706-1728. doi:10.1093/bib/bbaa001
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