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Hifair™ Super Reverse Transcriptase é uma transcriptase reversa de última geração, qual era enãoprojetado de M-MLV. Esta enzima não tem atividade de RNase H e exibe estabilidade térmica significativamente melhorada, tolerando temperaturas de reação de até 70°C. É altamente adequada para transcrição reversa eficiente de moldes de RNA com estruturas secundárias complexas.
Aplicações
Este produto é adequado para experimentos de RT-PCR, RT-qPCR, RT-LAMP, RNA-seq e síntese de cDNA. A temperatura da reação de transcrição reversa pode atingir até 70°C.
Definição de unidade
Uma unidade (U) de atividade enzimática é definida como a quantidade de enzima necessária para incorporar 1 nmol de dTTP em material insolúvel em ácido em 10 minutos a 37 °C, usando Poly(A).Oligo(dT) como modelo-primer.
Componente
| Componente | Nome | 14612ES92 | 14612ES93 |
| 14612 | Hifair™ Super Transcriptase Reversa (200 U/μL) | 50 μL | 250 μL |
Condições de armazenamento
Armazene entre -25˚C e -15˚C por até 18 meses.
Instruções de uso
Procedimento de síntese de cDNA de primeira fita
1. Desnaturação de RNA (etapa opcional)
1. A desnaturação do RNA ajuda a abrir estruturas secundárias, melhorando significativamente o rendimento do cDNA da primeira fita.
| Componente | Volume |
| ddH2O livre de RNase | para 13 μL |
| Oligo(dT)18 (50 μM) ou Primers Aleatórios (50 μM) ou Primers Específicos de Genes (2 μM) | 1 μL |
| Modelo de RNA | RNA total: 10 pg - 5 μg ou mRNA: 10 pg - 500 ng |
· Aqueça a 65°C por 5 minutos e depois deixe esfriar rapidamente no gelo por 2 minutos.
· Centrifugue brevemente para coletar o líquido da reação e adicione a mistura de reação de transcrição reversa, conforme mostrado abaixo.
2. Configuração da reação de transcrição reversa (sistema de 20 μL)
| Componente | Volume |
| Mistura de reação da etapa anterior | 13 μL |
| Tampão de reação 5× | 4 μL |
| Mistura dNTP (10 mM) | 1 μL |
| Transcriptase reversa Hifair® Super (200 U/μL) | 1 μL |
| Inibidor de RNase (40 U/μL) | 1 μL |
3. Configurações do programa de transcrição reversa
| Temperatura | Tempo |
| 25°C* | 5 minutos |
| 50-70°C | 15-30 minutos |
| 85°C** | 5 minutos |
*Ao usar Primers Aleatórios, incubar a 25°C por 5 minutos. Se usar Oligo(dT)18 ou Primers Gene-Specific, esta etapa pode ser omitida.
O aquecimento a 85 °C por 5 minutos inativa a transcriptase reversa e pode ser ajustado conforme necessário.
O produto de transcrição reversa pode ser usado imediatamente para reações subsequentes de PCR ou qPCR, armazenado por curto prazo a -20 °C ou para armazenamento de longo prazo a -80 °C após alíquota para evitar ciclos de congelamento e descongelamento.
Precauções
1. Mantenha um ambiente de laboratório limpo; use luvas e máscaras limpas. Garanta que todos os consumíveis experimentais sejam livres de RNase para evitar contaminação.
2. Realize todas as operações no gelo para evitar a degradação do RNA.
3. Use amostras de RNA de alta qualidade para garantir uma transcrição reversa eficiente.
4. Este produto é somente para uso em pesquisa.
5. Para sua segurança e saúde, use jaleco e luvas descartáveis ao manusear o produto.
Documentos:
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Perguntas frequentes
O produto é apenas para fins de pesquisa e não se destina ao uso terapêutico ou diagnóstico em humanos ou animais. Os produtos e o conteúdo são protegidos por patentes, marcas registradas e direitos autorais de propriedade da
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