Kit de ensaio de genes de repórter de luciferase dual _ 11402es
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Kit de ensaio de genes de repórter de luciferase dual _ 11402es
Kit de ensaio de genes de repórter de luciferase dual _ 11402es
A luciferase Firefly é uma proteína com um peso molecular de cerca de 61 kDa, que pode catalisar a oxidação da luciferina para oxiluciferina na presença de ATP, íons de magnésio e oxigênio. Ela emite bioluminescência com um comprimento de onda de cerca de 560 nm. A luciferase Renilla é uma proteína com um peso molecular de cerca de 36 kDa, que pode catalisar a oxidação da coelenterazina para coelenteramida na presença de oxigênio, e emite um comprimento de onda de 480 nm durante o processo de oxidação. sobre bioluminescência....

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Kit de ensaio de genes de repórter de luciferase dual _ 11402es

YeasenSku: 11402ES10
Tamanho: 10 t
Preço:
$25.00
Estoque:
Em estoque

A luciferase Firefly é uma proteína com um peso molecular de cerca de 61 kDa, que pode catalisar a oxidação da luciferina para oxiluciferina na presença de ATP, íons de magnésio e oxigênio. Ela emite bioluminescência com um comprimento de onda de cerca de 560 nm. A luciferase Renilla é uma proteína com um peso molecular de cerca de 36 kDa, que pode catalisar a oxidação da coelenterazina para coelenteramida na presença de oxigênio, e emite um comprimento de onda de 480 nm durante o processo de oxidação. sobre bioluminescência. Ambas as bioluminescências podem ser medidas por quimioluminescência. O princípio de detecção é mostrado na figura 1:

Figura 1: Esquema do ensaio de luciferase Firefly e Renilla

Normalmente, o 5'UTR ou promotor do gene alvo é clonado a montante da Firefly Luciferase, ou o 3'UTR é clonado a jusante da Firefly Luciferase, e o efeito de regulação transcricional do promotor ou elemento regulador é detectado pela detecção da quantidade de firefly luciferase. Renilla Luciferase foi usada como um controle interno para eliminar diferenças no número de células, eficiência de transfecção, etc. O Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit usa luciferina como substrato para detectar a atividade do gene repórter da luciferase do firefly e, em seguida, usa coelenterazina como substrato para detectar a luciferina Renilla enquanto extingue a reação de fluorescência. Atividade do gene repórter enzimático. O kit tem as características de alta sensibilidade.

Características

Capacidade de lise aprimorada: capaz de lisar completamente a grande maioria dos tipos de células.

Sinal mais forte: detecção precisa da expressão do promotor fraco.

Maior sensibilidade: detectável até 10-20 picomoles de moléculas de luciferase.

Faixa linear mais ampla: a faixa de detecção linear excede 8 ordens de magnitude da concentração da enzima.

Aplicações

Verificação das interações de miRNA com 3'UTRs do gene alvo

Verificação das interações lncRNA-miRNA

Verificação da regulação do fator de transcrição na região promotora

Análise da via de sinalização

Análise de atividade SNP

Especificações

Forma

líquido

Luciferase

Firefly e Renilla

Meia-vida do sinal

30 minutos

Número de componentes do produto

5

Fluxo de trabalho

Dois Spasso

Componentes

Componentes No.

Nome

11402ES60

11402ES80

11402-A

Lisados ​​celulares

20 mL

10×20 mL

11402-B

Tampão luciferase Firefly

10 mL

10×10 mL

11402-C

Substrato de luciferase de vaga-lume (50 ×)

200 μL

10×200 μL

11402-D

Tampão Renilla Luciferase

10 mL

10×10 mL

11402-E

Substrato Renilla Luciferase (50 ×)

200 μL

10×200 μL

Envio e armazenamento

Os produtos do kit de ensaio de gene repórter de luciferase dupla devem ser armazenados a -15℃ ~ -25℃ para 1 ano.

Figuras

Figura 1. YEASEN (Gato#: 11402) tem uma intensidade de fluorescência comparável à da Marca P.

Figura2. EFACILITAR (Gato#: 11402) reagentes de detecção interagem com a luciferase para atingir intensidade de luminescência ótima. Após a adição do substrato de luciferase Renilla, a bioluminescência da luciferase de vaga-lume é extinta: ela pode ser essencialmente extinta completamente.

Documentos:

Ficha de dados de segurança

11402 MSDS HB220209 PT.PDF

Manuais

11402 Manual HB241230 PT.pdf

Citações e referências:

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[2] Zhao L, Zhu Y, Tao H, et al. Ailanthone melhora a fibrose pulmonar suprimindo a ativação de MEOX1 dependente de JUN. Acta Pharm Sin B. 2024;14(8):3543-3560. doi:10.1016/j.apsb.2024.04.013(SE=14,5)

[3] Wu X, Chen S, Zhang Z, et al. Uma via de RNA interferente viral pequeno-hospedeiro mRNA da planta modula a tolerância à seca induzida por vírus ao aumentar a autofagia. Plant Cell. 2024;36(9):3219-3236. doi:10.1093/plcell/koae158(SE=12,6)

[4] Xuan H, Li Y, Liu Y, et al. O domínio H1/H5 contribui para a separação de fases e repressão genética do OsTRBF2 durante o desenvolvimento do arroz. Plant Cell. 2024;36(9):3787-3808. doi:10.1093/plcell/koae199(SE=12)

[5] Han Y, Hu Q, Gong N, et al. A variação natural em MAIS GRÃOS 1 regula o número e o peso dos grãos no arroz. J Integr Plant Biol. 2024;66(7):1440-1458. doi:10.1111/jipb.13674(SE=11,4)

[6] Pan M, Luo M, Liu L, et al. EGR1 suprime o crescimento de HCC e a glicólise aeróbica por meio da regulação negativa transcricional de PFKL. J Exp Clin Cancer Res. 2024;43(1):35. Publicado em 29 de janeiro de 2024. doi:10.1186/s13046-024-02957-5(SE=11,3)

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[8] Wu J, Li P, Li M, et al. O estresse por calor prejudica a terminação do meristema floral e o desenvolvimento do fruto ao afetar a cascata BR-SlCRCa no tomate. Plant Commun. 2024;5(4):100790. doi:10.1016/j.xplc.2023.100790(SE=10,5)

[9] Chen L, Xia S, Wang F, et al. A ablação de NR1D1 induzida por metilação de m6A interrompe o relógio circadiano de HSC e promove fibrose hepática. Pharmacol Res. 2023;189:106704. doi:10.1016/j.phrs.2023.106704(SE=10,33)

[10] Niu MX, Feng CH, He F, et al. O módulo miR6445-NAC029 regula a tolerância à seca regulando a expressão da glutationa S-transferase U23 e a eliminação de espécies reativas de oxigênio em Populus. New Phytol. 2024;242(5):2043-2058. doi:10.1111/nph.19703(SE=9,4)

[11]Huang T, You Q, Huang D, e outros.Um feedback positivo entre PDIA3P1 e OCT4 promove as propriedades das células-tronco cancerígenas do carcinoma espinocelular esofágico. Cell Commun Signal. 2024;22(1):60. Publicado em 22 de janeiro de 2024. doi:10.1186/s12964-024-01475-3(SE=8,4)

[12]Wang S, Liu Y, Hao X, Chen Y, Wang Z, Shen Y. Melhorando as defensinas vegetais em um arbusto do deserto: Explorando uma via regulatória de AnWRKY29. Int J Biol Macromol. 2024;270(Pt 1):132259. doi:10.1016/j.ijbiomac.2024.132259(SE=8,2)

Storage

The Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit products should be stored at -15℃ ~ -25℃ for 1 year.

FAQ

Yes, they can be stored at -80°C, similar to standard protein storage protocols. Lysed samples can be stored at -80°C for up to 6 months and at -20°C for up to 1 month.
Strict light protection is not required during operation. However, store them protected from light. Low temperature is a more critical storage condition—especially for coelenterazine (the Renilla substrate), which is recommended to be stored at -80°C.
The ratio should be adjusted according to specific experimental conditions. Pilot experiments are recommended—for instance, testing Renilla vector to Firefly vector ratios at 1:10, 1:20, 1:50, and 1:100.
They are assayed in the same well. There is no mutual interference because the Renilla luciferase substrate reagent contains a compound that quenches Firefly luminescence. While separate assays are possible, sequential measurement in a single well is standard.
Different microplate readers vary in sensitivity and parameter settings, which can lead to differences in background signal readings for the same sample.
Opaque white microplates.
Add 0.3 mL of Triton X-100 to 10 mL of PBS to prepare a 3% Triton X-100 solution.
Dilute the cell lysate sample 5-fold prior to testing.
1. Luciferase is expressed intracellularly and is a enzyme non-native to humans (yielding extremely low background). It cannot cross cell membranes. In contrast, luciferase substrates are hydrophobic, cyclic small molecules that penetrate cell membranes easily. Thus, any luciferase expression is exogenous, and adding substrate directly to culture media or injecting it in vivo yields detectable signals.
2. In vitro reporter assays require cell lysis to homogenize samples, overcoming transfection heterogeneity, uneven substrate permeability, and signal variation. In vitro reporter assays are highly quantitative and sensitive, requiring ATP and oxygen. Cell lysis fully releases expressed luciferase to optimize the reaction; since intracellular oxygen is limited, omitting lysis leads to signal reduction (some lysis buffers include optimized additives like ATP to boost signal). Therefore, cell lysis ensures superior signal in in vitro assays. 3. In vivo imaging instruments possess high sensitivity and power capable of penetrating skin and tissue, enabling strong signal detection without cell lysis.
No, the order cannot be adjusted. In this kit, Component B (Firefly Luciferase Buffer) is essential for detecting both Firefly and Renilla luciferases. The optimal reaction environment for Renilla luciferase requires the presence of Component B; otherwise, Renilla luciferase readings will be extremely low.

Citations

Documents

Manual
11402_Manual_HB260114_EN.pdf
MSDS
11402_MSDS_HB220209_EN.pdf

Applications

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Perguntas frequentes

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