O kit de PCR direto de tecido vegetal é um kit que pode amplificar diretamente diferentes tipos de folhas de plantas por PCR, com ampla adaptabilidade e forte estabilidade. O kit usa um sistema de tampão de lise exclusivo, que pode lisar rapidamente uma variedade de amostras de plantas e liberar DNA genômico. O DNA genômico liberado pode ser usado diretamente como um modelo sem remover proteína, RNA ou metabólitos secundários na reação de PCR. Além disso, o kit requer uma pequena quantidade de amostra, folhas de plantas de até 1 mm podem ser usadas para experimentos.
O 2×Plant Master Mix fornecido neste kit tem forte compatibilidade de amplificação e pode usar diretamente o lisado da amostra como um modelo para amplificação eficiente e específica. Este reagente é uma mistura de reação de PCR concentrada 2 vezes, que contém todos os componentes usados para amplificação de PCR, exceto o modelo e os primers, o que simplifica muito o processo de operação e reduz a chance de contaminação.
O kit pode ser usado para identificação de plantas transgênicas, genotipagem de plantas, etc.
Envio
Os produtos são enviados com bolsas de gelo.
Armazenar
1. O reagente 10187-A [Tampão P1] pode ser armazenado a 4℃ por 1 ano.
2. Reagente 10187-B [Tampão P2], usado para neutralizar o lisado, que é benéfico para armazenar a amostra por mais tempo, e pode ser armazenado a 4℃ por 1 ano.
3. O reagente 10187-C [2× Plant Master Mix] pode ser armazenado a -20℃ por 1 ano. Evite congelamento e descongelamento repetidos.
Cuidados
1. Ao fazer experimentos com folhas, é recomendado usar tecido foliar recém-coletado. Se for um tecido congelado de longo prazo, ele precisa ser armazenado a -80°C. Congelamento e descongelamento repetidos devem ser evitados tanto quanto possível para evitar a degradação do molde e afetar a eficiência da PCR. O tecido foliar é adequado para folhas jovens. Se for uma folha madura, evite usar o tecido da nervura principal da folha.
2. Recomenda-se amplificar o fragmento dentro de 1 kb de comprimento para melhor eficiência de amplificação.
3. Ao amostrar, use um furador ou faca para pegar uma amostra de tamanho adequado. Quando as amostras forem diferentes, o furador ou faca precisa ser limpo toda vez antes de processar a amostra.
4. Para tecido foliar, é recomendado pegar folhas de 1-10 mm, comprimento de folha muito pequeno levará a baixo rendimento de amplificação de PCR, muito inibirá a reação de PCR, use o método de craqueamento térmico, trituração com uma ponta de pipeta e trituração com um moedor para tratar folhas de plantas. Após o tratamento, ele precisa ser agitado e centrifugado. Certifique-se de pegar o sobrenadante para teste. A precipitação inibirá seriamente a reação de PCR.
5. Para sua segurança e saúde, use jalecos e luvas descartáveis para a operação.
6. Este produto é SOMENTE para uso em pesquisa！
| Problemas comuns | Possíveis causas | Soluções |
| Não houve bandas no controle positivo e nas amostras a serem testadas. | O sistema de reação de PCR ou as condições de reação não eram adequados. | Use PCR de gradiente para explorar as condições ideais de reação para PCR. |
| O armazenamento inadequado dos reagentes de PCR os inativa. | 2×PCR Mix deve ser armazenado a -20℃, evite congelamento e descongelamento repetidos ao usar. Se usado com frequência, pode ser armazenado a 4°C por um curto período. | |
| Problemas de design do primer. | Tente redesenhar os primers para verificar. | |
| O controle positivo tem uma banda de interesse, e a amostra a ser testada não tem banda ou tem uma banda fraca. | A proporção de tampão de lise e tampão de neutralização é inadequada, e a mistura de lise afetará o valor de pH do sistema de PCR. | Em condições normais, o pH da mistura de lise neutralizada deve estar em torno de 7-8 (o produto de lise e o tampão P2 devem ser neutralizados em estrita conformidade com a proporção de 5:1). |
| A mistura de lise da amostra foi armazenada incorretamente ou por muito tempo, e o genoma do DNA foi degradado. | A mistura de lisado pode ser armazenada a 4°C por 5 dias. Tente usar uma mistura de lisado recém-preparada para PCR. | |
| A quantidade de modelo adicionado não é adequada. | Otimize a quantidade de modelo adicionado dentro da faixa de <5% do sistema de reação. | |
| Número insuficiente de ciclos de PCR. | Aumente apropriadamente o número de ciclos de PCR, preferencialmente 35-40 ciclos. Devido à complexidade do molde, geralmente é melhor usar 5-10 ciclos a mais de reação de PCR do que usar molde de DNA purificado. | |
| Amplificação não específica | Temperatura de anelamento de PCR muito baixa, número de ciclos, concentração de primer ou concentração de modelo muito alta. | Aumente a temperatura de anelamento da PCR e diminua o número de ciclos da PCR, a concentração do primer ou a concentração do molde. |
| Incompatibilidade de primers de PCR. | Redesenhar primers de PCR. | |
| A temperatura está muito alta ao preparar o sistema de reação de PCR ou o tempo definido é muito longo após a preparação. | A preparação do sistema de reação de PCR é realizada em baixa temperatura, e a reação de amplificação de PCR é realizada o mais rápido possível após a conclusão da preparação. | |
| A banda alvo aparece no controle negativo | Contaminação de instrumentos operacionais ou reagentes. | Todos os reagentes ou equipamentos do experimento devem ser autoclavados.Tenha cuidado e delicadeza ao manusear para evitar que a sequência alvo seja sugada para dentro da pistola de amostra ou derramada para fora do tubo de centrífuga. |
| Contaminação cruzada entre amostras. | Cada amostrador é usado apenas para uma amostra; ou depois de coletar uma amostra, mergulhe a lâmina do amostrador em solução de hipoclorito de sódio a 2%, enxágue repetidamente e depois seque o resíduo com uma toalha de papel limpa. |
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