Este kit pode conduzir direta e rapidamente a amplificação de PCR de tecido de camundongo (como cauda de camundongo, orelha de camundongo, dedo de camundongo, músculo, etc.) e tem forte compatibilidade de amostra. Equipado com um poderoso tampão de lise, este kit pode lisar amostras rapidamente e liberar DNA genômico. O lisado pode ser adicionado diretamente ao sistema de reação de PCR sem purificação, e a operação é conveniente. Além disso, este kit requer baixa entrada de amostra, e 5 mg de tecido de camundongo ou 1-5 mm de cauda de camundongo podem ser usados para experimentos.
O 2× Mouse Direct PCR Mix fornecido por este kit é uma solução de reação de PCR de partida a quente com uma concentração de 2 vezes. Ele contém todos os componentes usados para amplificação de PCR, exceto o modelo e os primers, o que simplifica muito o processo de operação e reduz a chance de contaminação. O kit pode ser usado para identificação de transgene, genotipagem de camundongo, etc.
Características
- Menos amostra necessária: 5 mg de tecido de camundongo ou 1-5 mm de cauda de camundongo
- Preparação conveniente do modelo: sem necessidade de moer, sem necessidade de refinar e purificar o DNA, maior fluxo, economia de tempo e dinheiro
- Sistema de PCR otimizado: com maior especificidade e maior tolerância ao inibidor da reação de PCR
Aplicações
- Identificação de camundongos transgênicos
- Genotipagem de ratos
- Análise de knockout de gene de camundongo
Especificações
| Especificação do produto | Kit |
| Início quente | Partida a quente integrada |
| Condições para transporte | Bolsas de gelo |
| Tipo de produto | Kit PCR direto |
| Aplicar para (aplicativo) | Cauda de rato, orelha de rato, dedo de rato, vísceras, pele, etc. |
Componentes
| Componentes No. | Nome | 10185ES50 | 10185ES70 |
| 10185-A | Tampão ML | 5×1 mL | 20×1 mL |
| 10185-B | Tampão MT | 0,6 mL | 2×1,25 mL |
| 10185-C | 2× Mistura de PCR direta para camundongos | 500 μL | 2×1 mL |
- a) O tampão ML é um tampão de lise que contém fortes desnaturantes de proteínas. Use luvas.
- b) O Buffer MT é um buffer de parada usado para interromper a função de lise do Buffer ML.
- c) 2× Mix de PCR direto para camundongo: contém Taq DNA polimerase de partida a quente, mix de dNTP, MgCl2, tampão de reação, intensificador de reação de PCR, otimizador, estabilizador, corante indicador de eletroforese, etc.
Armazenar
- Componente A: O produto deve ser armazenado a 2°C~8°C por um ano. Para uso múltiplo por um longo período, evite contaminação cruzada.
- Componente B/C: O produto deve ser armazenado em-25℃ ~ -15℃ por um ano. Por favor, evite congelamento e descongelamento repetidos.
Figuras
1. Resultado da amplificação do gene alvo (dentro de 1 kb)
Figura 1.Adequado para amplificação de genes alvo dentro de 1 kb.
2. Demonstração da velocidade de extensão
Figura 2. Gene de 500 pb, a velocidade de extensão pode ser tão rápida quanto 1 s/kb.
Citado de "TFPI é um receptor de cripta colônica para TcdB do clado 2 hipervirulento C. difficile. Cell . 2022 Mar 17;185(6):980-994.e15. doi: 10.1016/j.cell.2022.02.010. "
[1] Luo J, Yang Q, Zhang X, et al. TFPI é um receptor de cripta colônica para TcdB do clado 2 C hipervirulento. difícil. Célula. 2022;185(6):980-994.e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010(IF:41.584)
[2] Zhao J, Chen J, Li YY, Xia LL, Wu YG. A tirosina quinase de Bruton regula a inflamação induzida por macrófagos no rim diabético por meio da ativação do inflamossomo NLRP3. Int J Mol Med. 2021;48(3):177. doi:10.3892/ijmm.2021.5010(IF:4.101)
| Problema comum | Possível razão | Solução |
| Não houve bandas no controle positivo e nas amostras a serem testadas. | O sistema de reação de PCR ou as condições de reação não eram adequados. | Use PCR de gradiente para explorar as condições ideais de reação para PCR. |
| O armazenamento inadequado dos reagentes de PCR causa perda de atividade. | 2× Mouse Direct PCR Mix deve ser armazenado a -20°C e evitar congelamento e descongelamento repetidos durante o uso. Se usado com frequência, pode ser armazenado a 4°C por um curto período. | |
| Problemas de design do primer. | Tente redesenhar os primers para verificar. | |
| O controle positivo tem uma banda de interesse, e a amostra a ser testada não tem banda ou tem uma banda fraca. | Armazenamento inadequado ou prolongado pode causar perda da atividade do reagente. | Use reagentes novos. |
| Adicione lisado de tecido em excesso. | Aumente o sistema de reação ou reduza a quantidade de lisado. | |
| A mistura de lise da amostra foi armazenada incorretamente ou por muito tempo, e o genoma do DNA foi degradado. | A mistura de lisado pode ser armazenada a 4°C por 2-3 dias.Tente usar uma mistura de lisado recém-preparada para PCR. | |
| A quantidade de modelo adicionado não é adequada. | A quantidade de modelo adicionado foi otimizada dentro da faixa de 1-10% do sistema de reação. | |
| Número insuficiente de ciclos de PCR. | Aumente o número de ciclos de PCR, preferencialmente 35-40 ciclos. Devido à complexidade do molde, as reações de PCR devem ser realizadas com 5-10 ciclos a mais do que com o molde de DNA purificado. | |
| Amplificação não específica | Temperatura de anelamento de PCR muito baixa, número de ciclos, concentração de primer ou concentração de modelo muito alta. | Aumente a temperatura de anelamento da PCR e diminua o número de ciclos da PCR, a concentração do primer ou a concentração do molde. |
| Incompatibilidades de primers de PCR. | Redesenhar primers de PCR. | |
| A temperatura está muito alta ao preparar o sistema de reação de PCR ou o tempo é muito longo após a conclusão da preparação. | A preparação do sistema de reação de PCR é realizada em baixa temperatura, e a reação de amplificação de PCR é realizada o mais rápido possível após a conclusão da preparação. | |
| A banda alvo aparece no controle negativo | Contaminação de instrumentos operacionais ou reagentes. | Todos os reagentes ou equipamentos no experimento devem ser autoclavados. Tenha cuidado e delicadeza ao manusear para evitar que a sequência alvo seja sugada para dentro da pistola de amostra ou derramada para fora do tubo de centrífuga. |
| Contaminação cruzada entre amostras. | Cada amostrador é usado apenas para uma amostra; ou depois de coletar uma amostra, mergulhe a borda do amostrador em solução de hipoclorito de sódio a 2%, enxágue repetidamente e depois seque o resíduo com uma toalha de papel limpa. |
Storage
FAQ
Dissociation operation differences: 10185: Dissociate component A and termination dissociation component B separately, and mix them after dissociation is complete. 10181: Add dissociation component A and termination dissociation component B together, but the termination dissociation requires 5 minutes.
Citations
Applications
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Perguntas frequentes
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