Detecção, prevenção e remoção de micoplasma - tudo em uma única etapa!

Micoplasma

Mycoplasma, também conhecido como micoplasma, é o menor e mais simples procarioto descoberto até hoje, com um diâmetro de 0,1 a 0,3 μm. Ele pode passar por filtros e exibe alto pleomorfismo, aparecendo em várias formas, como esférica, em forma de bastonete, filamentosa e ramificada. Em laboratórios e produção biofarmacêutica, as culturas de células são propensas à contaminação por micoplasma. De acordo com a literatura, a incidência de contaminação por micoplasma em linhagens celulares armazenadas é de aproximadamente 15%-35%, e na indústria biofarmacêutica, varia de 0,44%-6,70%. ^[1].

Figura 1: Morfologia do Mycoplasma

Impacto da contaminação por micoplasma

A contaminação bacteriana e fúngica é relativamente fácil de detectar, prevenir e remover, mas a contaminação por micoplasma é difícil de notar. Mesmo em densidades de crescimento tão altas quanto 10^7-10^9 UFC/ml, pode não haver sinais óbvios de contaminação (como turbidez ou alterações de pH). A contaminação por micoplasma pode levar a várias alterações nas células (veja a Figura 2).

Figura 2: Alterações nos estados celulares após contaminação por micoplasma

Cenários de aplicação para detecção de micoplasma

Fontes típicas de contaminação por micoplasma

• Contaminação cruzada entre células;
• Contaminação do ambiente de trabalho ou do equipamento experimental;
• Má técnica asséptica do experimentador;
• Contaminação de meios de cultura ou outros reagentes;
• Contaminação do tecido ou órgão original usado para preparação de células.

O que fazer quando culturas de células encontram contaminação por micoplasma

Figura 3: Solução total para contaminação por micoplasma

Solução três em um para contaminação por micoplasma em células

1. Detecção de micoplasma

Detecção isotérmica de micoplasma em uma etapa:

YeasenO reagente de detecção de micoplasma isotérmico de uma etapa da usa tecnologia de amplificação isotérmica exclusiva, oferecendo discriminação de cores mais forte — de azul-púrpura (negativo) a azul-celeste (positivo) — facilitando a identificação visual. Inclui componentes anticontaminação para eliminar falsos positivos.

Figura 4: Processo operacional de detecção de micoplasma em uma etapa

Detecção de micoplasma baseada em PCR:

YeasenO método de detecção de micoplasma por PCR da difere do PCR convencional de uma etapa ao usar três pares de primers em vez de um, visando as regiões conservadas 16S e 23S do micoplasma para amplificação por PCR aninhada. Isso melhora significativamente a sensibilidade, ao mesmo tempo em que reduz a não especificidade, detectando apenas uma única cópia do micoplasma.

Figura 5: Imagem de eletroforese em gel da amplificação por PCR de amostras com diferentes concentrações de micoplasma

Figura 6: Imagem de eletroforese em gel da amplificação por PCR de amostras com diferentes concentrações de micoplasma

Tabela 1: Tipos de micoplasma detectáveis ​​por YeasenReagente de detecção isotérmica de micoplasma em uma etapa

Nota: A seção azul indica os tipos de micoplasma detectáveis ​​pelos métodos de detecção isotérmica de uma etapa e PCR.

2. Reagente de eliminação de micoplasma MycAway (1000×)

O MycAway Mycoplasma Elimination Reagent (1000×) é uma formulação mista que elimina efetivamente o micoplasma ao inibir o DNA e a síntese de proteína essencial necessária para o crescimento do micoplasma, sem prejudicar as células. Ele salva suas células ao máximo e reduz as perdas devido à contaminação por micoplasma.

Figura 7: Demonstração do efeito de eliminação celular

Características do reagente de eliminação de micoplasma:

• Baixa toxicidade: Citotoxicidade mínima, não afeta experimentos celulares subsequentes como testes de viabilidade celular e transfecção;
• Alta estabilidade: Pode ser armazenado a -20°C por períodos prolongados, mantendo a eficácia;
• Fácil de usar: Basta adicionar o produto ao meio de cultura contaminado com micoplasma e incubar;
• Ação rápida: Resultados visíveis em apenas 3 dias;
• Amplo espectro: Eficaz contra a maioria dos tipos de micoplasma de laboratório.

Figura 8: Diagrama do teste de citotoxicidade do reagente de eliminação de micoplasma

3. Prevenção de micoplasma

Produto Informação

categoria	Nome do produto	Cat No.	Especificações
Detecção	MycAway™ - Kit de detecção de micoplasma em uma etapa colorida	40612ES25/60	25/100 toneladas
	Kit de detecção de qPCR em tempo real de micoplasma MycAway™	40618ES25/60	25/100 toneladas
	Kit de teste de micoplasma GMyc-PCR	40601ES10/20	10/20 ensaios
Remoção	Spray MycAway™ (Pronto para uso)	40605ES02/03	1/2×500 mL
	Tratamento MycAway™ (1000×)-Reagente de eliminação de micoplasma	40607ES03/08	1/5×1 mL
Prevenção	MycAway™Profilático (2000×)-Reagente de prevenção de micoplasma	40608ES03/08	1/5×1 mL
	Solução MycGuard™ -1 (100×)	40609ES60	100 mL
	Solução MycGuard™-2 (500×)	40610ES60	100 mL