효소 절단 효율이 높고, RNase 잔류물이 없어 다양한 시나리오에 적합합니다.
실험실에서 자주 사용되지만, RNA 정량의 정확도에 영향을 주지 않고 RNA 샘플에서 오염된 DNA를 제거하는 것은 여전히 많은 연구자들에게 어려운 과제입니다. 이 문제를 해결하는 황금률(gold standard)인 DNase I(디옥시리보뉴클레아제 I)은 고유한 이중 가닥/단일 가닥 DNA 분해 능력으로 인해 RNA 연구에서 핵심적인 역할을 합니다.
소화 조건 | DNase I의 작동 원리
DNase I은 단일 가닥 또는 이중 가닥 DNA를 분해할 수 있는 비특이적 엔도뉴클레아제입니다. 인산디에스터 결합을 가수분해하여 5'-인산기와 3'-OH기를 포함하는 모노디옥시뉴클레오타이드와 올리고디옥시뉴클레오타이드를 생성합니다. DNase I의 최적 작동 pH 범위는 7-8입니다. 활성은 Ca 2+ 에 따라 달라지며, Mn 2+ , Mg 2+ , Zn 2+ 와 같은 2가 금속 이온에 의해 활성화될 수 있습니다 .
- Mg 2+ 가 존재하면 DNase I은 이중 가닥 DNA의 모든 부위를 무작위로 절단합니다.
- Mn 2+ 가 존재하는 경우 , DNase I은 DNA 이중 가닥의 동일한 부위를 절단하여 1~2개의 뉴클레오티드가 돌출된 뭉툭한 끝이나 끈적끈적한 끝을 형성할 수 있습니다.
그림 1. Mg 2+ 및 Mn 2+ 존재 하에서 DNase I에 의한 dsDNA 절단의 개략도
기존 DNase I 기술은 난제에 직면해 있습니다. 소 췌장 추출법은 원료 공급원이 복잡하고 RNase 잔류물 문제가 심각합니다. 정제 과정이 복잡할 뿐만 아니라 제품의 균일성을 보장하기도 어렵습니다. 대장균 발현 시스템은 생합성 기전에 영향을 받아 생산량 한계에 직면합니다.
재조합 DNase I (RNase 없음, 효모 ) (Cat#14549/14550)
YeasenBio는 업계의 문제점을 직접적으로 해결하고 효모 발현 재조합 DNase I(RNase-free, 효모)(Cat#14549/14550)을 출시하여 진핵생물 발현 시스템의 고유한 장점을 활용하여 두 가지 핵심 기술 혁신을 달성했습니다.
- 생산성 혁신: 진핵생물 분비 발현 기술을 사용하여 세포 내 독소 축적을 효과적으로 피하는 동시에 고밀도 발효 기술을 결합하여 다양한 방법으로 생산 능력을 개선하여 대규모 생산 요구를 충족합니다.
- 성능 업그레이드: 효모 시스템의 자연적인 글리코실화 변형 덕분에 효소는 더 안정적인 공간 구조를 갖게 되었으며, 복잡한 샘플 환경에서도 여전히 효율적으로 DNA를 소화할 수 있습니다.
주요 제품 장점
- 매우 강력한 소화 활동
1μg의 플라스미드 DNA를 Yeasen과 다른 브랜드 공급업체 A의 DNase I을 다른 양으로 분해했습니다. 그 결과, Yeasen 14549ES의 플라스미드 DNA 제거 효율은 공급업체 A의 효율과 비슷한 것으로 나타났습니다.
그림 2 플라스미드 DNA 제거 효과 검증
- RNase 잔류물 없음
YeasenBio의 R ecombinant DNase I (RNase-free, Yeast) (Cat#14549) 10 U 를 RNA 기질과 함께 37°C에서 1시간 동안 배양했습니다. 아가로스 겔 전기영동 분석 결과, 효소 제제 3개 배치 모두에서 잔류 RNase 활성이 검출되지 않아 RNA 샘플 분해 위험을 완전히 제거하고 매우 높은 순도가 요구되는 RNA 분석 시나리오에서 신뢰할 수 있는 보호 기능을 제공했습니다.
그림 3 RNase 잔류물 결과 검증
- RNA 추출 응용 프로그램 검증
YeasenBio의 재조합 DNase I(RNase-free, Yeast)(Cat#14549) 의 RNA 추출 효과를 평가하기 위해 , 본 효소 제제 20 U을 사용하여 다양한 출처에서 채취한 12개의 마우스 간 전처리 시료를 처리했습니다. 이후 RNA 추출 및 아가로스 겔 전기영동 분석 결과, 효소 처리군의 RNA 무결성이 양호함을 확인했습니다. 이는 본 DNase I이 RNA의 품질에 영향을 미치지 않으면서 DNA를 효과적으로 분해하며, RNA 추출 실험의 기술적 요건을 충족함을 시사합니다.
그림 4 RNA 추출 응용 검증
DNase I 선택 가이드
다양한 응용 프로그램 요구 사항을 충족하기 위해 YeasenBio는 소 췌장 추출, 대장 재조합 발현, 효모 재조합 발현의 세 가지 공급원에서 DNase I을 제공할 수 있으며 GMP 등급 DNase I도 제공할 수 있습니다.
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설명 |
카탈로그 번호 |
애플리케이션 |
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소 췌장에서 추출하여 크로마토그래피로 제조하였으며, RNase A 활성이 매우 낮습니다. 동결건조 분말 형태로 제공됩니다. |
1. 샘플에서 RNA를 추출할 때 gDNA를 제거하세요. (미량 샘플인 경우 재조합 DNase I이 필요합니다.) 2. 단백질 연구: 단백질 제제에서 DNA를 제거합니다. |
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소 췌장에서 추출하여 크로마토그래피로 제조하였으며, RNase A 활성이 매우 낮습니다(≤0.0005%). 동결건조 분말 형태로 제공됩니다. |
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대장균에서 발현되는 DNase I(RNase 없음), 대장균에서 발현되는 재조합, RNase 없음, 액상 형태. |
다양한 응용 분야에 적합:
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Pichia pastoris에서 발현되는 DNase I(RNase 없음), RNase 없음, 액체 형태. |
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14550ES |
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대장균 에서 발현된 DNase I(RNase 없음) , GMP 등급, 액상 형태로 제공됩니다. |
GMP 의약품 등급. 의약품 원료 및 부형제 생산에 사용됩니다. GMP를 준수하는 제품 생산 및 품질 관리 절차를 통해 생산 공정과 모든 원료의 추적이 가능합니다. |
참고문헌
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