説明
T7 RNAポリメラーゼは、T7プロモーター配列（5'-TAATACGACTCACTATAG*-3'）を含む二本鎖DNAを鋳型とし、NTPを基質として、プロモーター下流のDNA逆鎖と相補的なRNAを合成します。平滑末端または5'オーバーハングを持つ直鎖二本鎖DNAはどちらもT7 RNAポリメラーゼの鋳型基質として使用できます。つまり、直鎖化プラスミドまたはPCR産物は、in vitro RNA合成の鋳型として使用できます。
このキットは、サンドイッチ酵素結合免疫吸着測定（ELISA）原理を用いて残留T7 RNAポリメラーゼを検出します。T7 RNAポリメラーゼ標準液および試験サンプルを、抗T7 RNAポリメラーゼ抗体（36705-A）をプレコートしたマイクロプレートウェルに加えます。次に、希釈したビオチン標識T7 RNAポリメラーゼ検出抗体（36705-C）を加え、続いてストレプトアビジン-HRP（SA-HRP）（36705-D）を加え、抗体 + 抗原 + 抗体-ビオチン + SA-HRP複合体を形成します。洗浄後、発色のためにTMB基質（36705-H）を加えます。TMBはHRPの触媒作用により無色から青色へと変化し、停止液（36705-I）を加えると最終的に黄色に変化します。黄色の強度は、サンプル中に検出されたT7 RNAポリメラーゼの量と正の相関関係にあります。
コンポーネント
|
いいえ。 |
名前 |
36705ES48 |
36705ES96 |
|
36705-A |
抗T7 RNAポリメラーゼコーティングマイクロタイターストリップ |
48 T |
96トン |
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36705-B* |
標準: T7 RNAポリメラーゼ |
1 バイアル |
2 バイアル |
|
36705-C |
検出 抗体：ビオチン結合 抗体 |
60 μL |
120 μL |
|
36705-D |
ストレプトアビジン-HRP |
30μL |
60 μL |
|
36705-E |
希釈バッファー1 |
25 mL |
45 mL |
|
36705-F |
洗浄バッファー濃縮率（20×） |
25 mL |
50 mL |
|
36705-G |
希釈バッファー2 |
15 mL |
30 mL |
|
36705-H |
TMB基質 |
8 mL |
15 mL |
|
36705-I |
停止ソリューション |
5 mL |
10 mL |
|
36705-J |
プレートシーラー |
3個ずつ |
5個ずつ |
*標準品36705-Bは凍結乾燥粉末です。
T7 RNA ポリメラーゼと互換性があります: 10625、10628、10629 。
検証データ
表 1. 直線性範囲: 1～32 ng/mL 、 R2=0.999 、 CV≤5%。
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標準偏差 |
濃度（ ng/mL） |
平均（ ng/mL） |
回復（ ％） |
CV% |
|
標準1 |
32 |
31.965 |
99.9% |
2.2% |
|
スタンダード2 |
16 |
16.070 |
100.5% |
5.0% |
|
スタンダード3 |
8 |
7.812 |
97.7% |
2.1% |
|
スタンダード4 |
4 |
4.192 |
104.8% |
0.8% |
|
5年生 |
2 |
2.020 |
101.8% |
3.5% |
|
6年生 |
1 |
1.173 |
117.3% |
0.0% |
|
ノースカロライナ州 |
0 |
/ |
/ |
/ |
表2. 高い特異性
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タンパク質名 |
濃度 |
検出されたかどうか |
|
ポジティブコントロール |
1 ng/mL |
検出 |
|
ネガティブコントロール |
0 ng/mL |
nd |
|
ウルトラヌクレアーゼ |
10μg /mL |
nd |
|
塩活性ウルトラヌクレアーゼ |
10μg /mL |
nd |
|
DNase I |
10μg /mL |
nd |
|
マウスRNase阻害剤 |
10μg /mL |
nd |
|
ワクシニアキャッピング酵素 |
10μg /mL |
nd |
|
無機ピロホスファターゼ |
10μg /mL |
nd |
|
mRNAキャップ2 ´-O-メチルトランスフェラーゼ |
10μg /mL |
nd |
|
1%BSA |
1 0 mg /mL |
nd |
表3. 定量限界：本製品の定量限界は、標準曲線の最低濃度点を希釈することにより決定されます。最低濃度における変動係数（CV）は20%未満です。これが定量限界（1 ng/mL）と定義されます。
|
標準td6理論値( ng/mL ) |
標準 6 検査平均値( ng/mL ) |
テストの繰り返し |
CV% |
回復 |
|
1 |
0.858 |
24 |
12.6% |
85.8% |
表4. LOD：本製品の検出限界は、陰性対照（NC）の検出値平均値に対応する標準濃度に標準偏差の2倍を加えた値と定義されます。24個のNC標準物質を測定し、平均値と標準偏差を計算した結果、検出限界は0.318 ng/mLと決定されました。
|
平均値（ OD ） |
SD （ OD ） |
平均値+2SD（OD） |
平均値+2SD （ng/mL） |
|
0.0527 |
0.0038 |
0.0604 |
0.3176 |
配送と保管
2～8℃で保存してください。未開封の場合は1年間、開封後は6ヶ月間保存可能です。
商品を受領したら、すべての構成部品が揃っているかどうかを確認し、対応する保管温度ですぐに保管してください。
文書:
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