説明
本製品は、大腸菌を用いた組換えタンパク質発現から得られたバクテリオファージT7 RNAポリメラーゼです。T7プロモーター配列（5'-TAATACGACTCACTATAG*-3'）を介し、二本鎖DNA上で5'→3'方向のRNA合成を触媒し、NTPを基質として利用します。二本鎖の直鎖平滑末端または5'突出末端を有するDNAはT7 RNAポリメラーゼの鋳型として使用できるため、直鎖化プラスミドおよびPCR産物はin vitroでのRNA合成の鋳型として使用できます。
注: G* は RNA 転写の最初の塩基です。
この製品は GMP 規制に従って製造され、液体の形で提供されます。
特徴
- 長い転写産物と短い転写産物を合成し、DNAテンプレート1μgでRNAを100～200μg生成できる。
- 高い収量と簡単な操作
- エンドトキシンの低下
- エンドヌクレアーゼ、エキソヌクレアーゼ、RNaseが存在しないことを確認済み
応用
- 放射性標識RNAプローブの調製
- RNAの構造、プロセシング、触媒作用の研究のためのRNA生成
- アンチセンスRNAによる発現制御
- mRNA、sgRNAの合成
仕様
| ソース | 大腸菌で発現 組み換えT7 RNAポリメラーゼ遺伝子 |
| 最適温度 | 37℃ |
| ストレージバッファ | 50 mM トリス-HCl、1 mM EDTA、10 mM DTT、100 mM NaCl、0.1% トリトンX-100、50% (v/v) グリセリン、25℃でpH7.9 |
| ユニット定義 | 37℃、pH8.0の条件下で1時間以内に1nmolの[3H]GMPを酸不溶性沈殿物に取り込むために必要な酵素量を1単位と定義する。 |
品質
| COAアイテム | 標準 |
| 活動 | 250～300U/μL |
| タンパク質 集中 | ≥0.5mg/mL |
| 純度 | ≥95% |
| エンドトキシン | <20 EU/mg |
| 残留プロテアーゼ | ネガティブ |
| 残留エキソヌクレアーゼ | ネガティブ |
| 残留ニッカーゼ | ネガティブ |
| 残留RNase | ネガティブ |
| E. 大腸菌宿主タンパク質 | 50ppm未満 |
| 大腸菌宿主 DNA | <10 fg/U |
| マイコプラズマDNA | ネガティブ |
コンポーネント
| コンポーネント番号 | 名前 | 10625ES10 (10 KU) | 10625ES60 (100 KU) | 10625ES86 (2,500 KU) | 10625ES99（100 MU） |
| 10625 | T7 RNAポリメラーゼGMPグレード（250 U/μL） | 40μL | 400μL | 10mL | 400mL |
配送と保管
T7 RNAポリメラーゼGMPグレード製品はドライアイスとともに出荷され、-15℃～-25℃で1年間保管できます。
数字
図 1. 標準 RNA は、T7 RNA 合成キットを使用して in vitro で合成されました。
反応液はPCR装置内で37℃で2時間インキュベートし、その後磁気ビーズ（Cat#12602）で精製した。収量はNanoDrop分光光度計で分析した（図1参照）。
図2. T7キットによる異なる長さのRNAの転写の実証。それぞれ電気泳動図（図2A）、キャピラリー電気泳動図（図2B）、クロマトグラム（図2C）で示されている。
図 3. キャップされた RNA の in vitro 合成。
反応液はPCR装置内で37℃で2時間インキュベートし、その後磁気ビーズ（Cat#12602）で精製した。収量はNanoDrop分光光度計で測定した（図3A参照）。完全性はキャピラリー電気泳動で測定した（図3B参照）。
10625_マニュアル_HB221111_EN.pdf
引用と参考文献:
支払いとセキュリティ
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問い合わせ
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よくある質問
この製品は研究目的のみに使用され、人間や動物の治療や診断に使用することを意図したものではありません。製品とコンテンツは、
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