説明
これは、野生型T7 RNAポリメラーゼを改変し、大腸菌で産生されたT7 RNAポリメラーゼの低dsRNAバリアントです。キャップアナログを効率的に取り込みながら二本鎖RNA（dsRNA）の産生を大幅に低減し、野生型T7 RNAポリメラーゼに匹敵する高効率のin vitro転写（IVT）を示します。T7プロモーター配列（5'-TAATACGACTCACTATAG*-3'）から二本鎖DNA上のRNAの5'→3'合成を触媒し、NTPを基質として利用します。
注: G* は RNA 転写の最初の塩基です。
この製品のオリジナルブランド名はCleaScrip™です。
特徴
- dsRNA 含有量の削減: dsRNA 含有量が 10 分の 1 以上削減されます。
- 高収量: 9 mg/mL を超える安定した収量。
- 低キャップアナログ入力**:キャップアナログ入力は 2.5 mM まで低減できます。
- 高いキャッピング効率**:キャッピング効率は 99% を超えます。
コンポーネント
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コンポーネント番号 |
名前 |
10628ES10 |
10628ES60 |
10628ES72 |
10628ES86 |
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（10 KU） |
（100 KU） |
（250 KU） |
（2,500 KU） |
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10628 |
Hieff T7 RNAポリメラーゼ（低dsRNA、250 U/μL） |
40μL |
400μL |
1mL |
10mL |
仕様
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ソース |
組み換え T7 RNAポリメラーゼ遺伝子を持つ大腸菌 |
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最適温度 |
37℃ |
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ストレージバッファ |
50 mM トリス-HCl、1 mM EDTA、10 mM DTT、100 mM NaCl、0.1% トリトンX-100、50% (v/v) グリセリン、25℃でpH7.9 |
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ユニット定義 |
37℃、pH8.0の条件下で1時間以内に1nmolの[ 3H ]GMPを酸不溶性沈殿物に取り込むのに必要な酵素量を1単位と定義する。 |
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推奨Mg2+ |
30mM酢酸マグネシウム |
QC標準
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アイテム |
仕様/規格 |
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酵素 活動 |
250 ～ 300U/μL |
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タンパク質の純度 |
≥95% |
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エンドトキシン |
<20 EU/mg |
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プロテアーゼ |
ネガティブ |
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エキソヌクレアーゼ |
ネガティブ |
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ニッカセ |
ネガティブ |
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RNase |
ネガティブ |
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大腸菌宿主タンパク質 |
50ppm未満 |
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大腸菌宿主DNA |
<10 fg/U |
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マイコプラズマ検査 |
ネガティブ |
関連製品
数字
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T7 RNAポリメラーゼ |
収量(mg/mL) |
mRNAの完全性（％） |
dsRNA含有量（％） |
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WT T7 |
9.5 |
81.9 |
0.29% |
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低dsRNA T7 |
9.0 |
82 |
0.0037% |
図2. マウスRAW264.7細胞におけるIVT産物の免疫原性評価（図2Aおよび2B）。変異体由来のmRNAを導入したRAW264.7細胞では、野生型と比較してIFN-β mRNAおよびタンパク質レベルが低下しており、野生型T7 RNAPによって合成されたmRNAが最も強い免疫応答を引き起こし、一方、変異体由来のmRNAでは応答が著しく低下したことが示唆された。
図 3. セルロース処理後、Hieff™ T7 RNA ポリメラーゼで合成した mRNA 内の dsRNA 含有量は、野生型酵素で合成した mRNA 内の dsRNA 含有量よりも低くなります。
配送と保管
商品はドライアイスと一緒に発送され、-15℃～-25℃で1年間保管可能です。
出版物:
改良T7 RNAポリメラーゼは末端転移酵素とRNA依存性RNAポリメラーゼの活性を低下させることでdsRNAの形成を減少させる、FEBSジャーナル、2025年3月3日
FADSおよび半合理的設計により改変されたT7 RNAポリメラーゼは、末端トランスフェラーゼおよびRDRP活性を低下させ、dsRNA産生を減少させた、bioxRxiv、2024年5月31日
文書
安全データシート
マニュアル
10628_マニュアル_Ver.EN20250724.pdf
関連ブログ：
Hieff™ 低dsRNA T7 RNAポリメラーゼ変異体、mRNAワクチンおよび治療法の開発を促進
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