L'RNA a doppio filamento (dsRNA) emerge come sottoprodotto durante la trascrizione in vitro dell'mRNA. Questo sottoprodotto possiede proprietà immunogeniche all'interno del corpo umano, in grado di provocare una risposta immunitaria, diminuendo di conseguenza i livelli di mRNA. Ciò rende il dsRNA un'impurità di processo problematica che richiede un'eliminazione completa e un controllo rigoroso della sua presenza residua.

Per affrontare questo problema, il kit di rilevamento ELISA dell'RNA a doppio filamento (dsRNA) impiega i principi sperimentali di un immunoenzimatico (ELISA) a sandwich con doppio anticorpo per la quantificazione del dsRNA residuo. Il kit può essere utilizzato non solo per il rilevamento di dsRNA regolari, ma anche per il rilevamento di peudo UTP, N1-Me-peudo UTP e dsRNA modificati con 5-OMe-UTP.

La procedura prevede l'aggiunta sia di uno standard che del campione di prova su una piastra enzimatica (designata come 36717-A) precedentemente rivestita con anticorpi anti-dsRNA. Successivamente, vengono aggiunti anticorpi di rilevamento dsRNA marcati con biotina (36717-F) in forma diluita. Infine, viene introdotta la Streptavidina-HRP (SA-HRP) (36717-G) per creare un complesso comprendente anticorpi, antigeni, biotina e SA-HRP.

Dopo il lavaggio della piastra, l'aggiunta della soluzione cromogenica TMB (36717-K) avvia lo sviluppo del colore. Sotto l'influenza della catalisi enzimatica HRP, il TMB subisce una trasformazione da incolore a blu, che viene poi arrestata tramite l'applicazione della soluzione di arresto (36717-L). In definitiva, questa trasformazione determina una tonalità gialla, la cui intensità è correlata positivamente alla quantità di dsRNA identificata nel campione.

Questo kit ha uno scopo versatile, consentendo l'ottimizzazione del processo di purificazione del prodotto biologico, il controllo delle impurità durante le fasi intermedie e il test di rilascio per la valutazione del prodotto finale.

Pprodotto Ealidazione Rapporto

Componenti

Spedizione e stoccaggio

Il kit viene spedito con un impacco di ghiaccio e può essere conservato a 2°C ~8°C. Il prodotto non aperto è valido per un anno. Una volta aperto, il reagente è valido per sei mesi. Non congelare mai questo prodotto.

Istruzioni

1. Preparazione prima dell'esperimento

1) Materiali sperimentali non forniti in questo kit ma necessari per l'esperimento:

a. Punte prive di RNasi;

b. Provetta da centrifuga priva di RNasi;

c. Carta priva di polvere;

d. Piastra di pretrattamento del campione priva di RNasi;

e. Acqua deionizzata o acqua bidistillata.

2) Strumenti e attrezzature richiesti ma non forniti:

a. Lettore di micropiastre multifunzionale (inclusa la modalità di rilevamento a doppia lunghezza d'onda, che copre 450 nm e 650 nm; in grado di utilizzare 450 nm come lunghezza d'onda di rilevamento e 650 nm come lunghezza d'onda di riferimento);

b. Lavatrice per piastre completamente automatica, miscelatore vortex, miscelatore a temperatura costante, centrifuga;

c. Micropipette di precisione e micropipette multicanale di diverse specifiche;

d. Timer, frigorifero a 4℃;

e. Agitatore per micropiastre.

2. Analisi dei risultati

a. Se il valore OD del campione da testare supera il valore OD nel punto più alto della curva standard, il campione deve essere diluito e misurato nuovamente.

b. Procedura di sviluppo della curva: creare una curva standard tracciando le concentrazioni standard sull'asse x e i corrispondenti valori di assorbanza standard calibrati sull'asse y. Vari strumenti software di disegno e statistici possono aiutare nella generazione di curve standard e nella determinazione di concentrazioni di campioni sconosciuti. Si consiglia di utilizzare un metodo di adattamento a quattro o cinque parametri per questo esperimento.Infine, calcolare la quantità residua di dsRNA nel campione facendo riferimento alla curva standard e tenendo conto del fattore di diluizione del campione.

c. La curva standard fornita è un esempio illustrativo (solo a scopo di riferimento). Il contenuto effettivo del campione deve essere determinato utilizzando una curva standard generata specificamente per lo stesso standard sperimentale.

3. Diagramma di flusso dell'esperimento

Figura 5 Diagramma di flusso dell'esperimento

4. Prestazioni del prodotto

Le prestazioni di questo kit sono state valutate completamente. Per i dettagli, contattare il personale tecnico per ottenere il corrispondente report di verifica delle prestazioni.

5. Appunti

1. Si prega di leggere attentamente il presente manuale di istruzioni prima di utilizzare il kit.
2. Si prega di utilizzare il prodotto entro il periodo di validità ed è vietato mescolare reagenti correlati provenienti da lotti diversi.
3. Tutti i reagenti devono essere riportati a temperatura ambiente prima dell'uso.
4. Per la vostra sicurezza e salute, vi preghiamo di indossare un camice da laboratorio e guanti monouso.
5. Questo prodotto è destinato esclusivamente alla ricerca scientifica.
   
   

   Documenti:

   Scheda di sicurezza

   Manuale