Questo prodotto è una RNA polimerasi T7 del batteriofago derivata dall'espressione proteica ricombinante in Escherichia coli. Catalizza la sintesi 5'→3' di RNA su DNA a doppio filamento dalla sua sequenza promotore T7 (5'-TAATACGACTCACTATAG*-3') e utilizza NTP come substrati. Il DNA con estremità smussate lineari a doppio filamento o estremità sporgenti 5' può essere utilizzato come stampo per la RNA polimerasi T7, quindi plasmidi linearizzati e prodotti PCR possono essere utilizzati come stampi per in vitro sintesi dell'RNA.
Nota: G* è la prima base della trascrizione dell'RNA.
Questo prodotto è realizzato in conformità alle normative GMP e fornito in forma liquida.
Caratteristica
- Sintetizzare trascrizioni lunghe e trascrizioni corte, l'RNA può essere prodotto a 100-200 μg con 1 μg di stampo di DNA
- Maggiore resa e facilità d'uso
- Endotossine inferiori
- Testato per l'assenza di endonucleasi, esonucleasi, RNasi
Applicazione
- Preparazione della sonda RNA radiomarcata
- Generazione di RNA per studi sulla struttura, l'elaborazione e la catalisi dell'RNA
- Controllo dell'espressione tramite RNA antisenso
- mRNA, sintesi sgRNA
Specificazione
| Fonte | Espresso in Escherichia coli con un gene ricombinante della RNA polimerasi T7 |
| Temperatura ottimale | 37℃ |
| Buffer di archiviazione | 50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0,1% Triton X-100, 50% (v/v) glicerina, pH 7,9 a 25℃ |
| Definizione di unità | La quantità di enzima richiesta per incorporare 1 nmol di [3H] GMP nel precipitato insolubile in acido entro 1 ora a 37°C e pH 8,0 è definito come 1 unità. |
Componenti
| Componenti n. | Nome | 10624ES90 (5.000 unità) | 10624ES97 (50.000 unità) |
| 10624 | T7 RNA polimerasi di grado GMP (50 U/μL) | 100 microlitri | 1 ml |
Spedizione e stoccaggio
I prodotti T7 RNA Polymerase di grado GMP vengono spediti con ghiaccio secco e possono essere conservati a una temperatura compresa tra -15℃ e -25℃ per un anno.
Cifre
Figura 1. L'RNA standard è stato sintetizzato in vitro utilizzando il kit di sintesi dell'RNA T7.
La reazione è stata incubata in uno strumento PCR a 37℃ per 2 ore e poi purificata con sfere magnetiche (Cat#12602). Il risultato della resa è stato analizzato dallo spettrofotometro NanoDrop come mostrato nella Figura 1.
Figure 2. La dimostrazione della trascrizione di RNA di diverse lunghezze mediante il kit T7 rispettivamente nell'elettroforesi (Figure 2A), nel diagramma dell'elettroforesi capillare (Figure 2B) e nel cromatogramma (Figure 2C)
Figura 3. Sintesi dell'RNA cappato in vitro.
La reazione è stata incubata in uno strumento PCR a 37℃ per 2 ore e poi purificata con sfere magnetiche (Cat#12602). Il risultato della resa è stato analizzato tramite spettrofotometro NanoDrop come mostrato nella Figura 3A. Il risultato dell'integrità è stato analizzato tramite elettroforesi capillare come mostrato nella Figura 3B.
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Storage
FAQ
1. Optimize the upstream sequence of the 3' end of the template;
2. Control the output of IVT. Under high production levels, the probability of self-expansion will be higher.
Citations
Documents
| Manual |
|---|
| 10624_Manual_HB221111_EN.pdf |
| MSDS |
|---|
| MSDS-10624-T7_RNA_Polymerase_GMP-grade_50_U__L_-HB220701.pdf |
Applications
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Indagine
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