D-luciférine, sel de potassium -40902ES
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La D-luciférine est un substrat commun de la luciférase et est largement utilisée dans la biotechnologie, en particulier dans la technologie d'imagerie in vivo. Le mécanisme d'action est que la luciférine (substrat) peut être oxydée pour émettre de la lumière en présence d'ATP et de luciférase. Lorsque la fluorescéine est en excès, le nombre quantique de lumière produite est égal aux concentrations de luciférase qui étaient corrélées positivement (voir la figure ci-dessous). Des plasmides portant le gène codant pour la luciférase (Luc) ont été transfectés dans des cellules et introduits...

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D-luciférine, sel de potassium -40902ES

YeasenSKU: 40902ES01
Taille: 100 mg
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La D-luciférine est un substrat commun de la luciférase et est largement utilisée dans la biotechnologie, en particulier dans la technologie d'imagerie in vivo. Le mécanisme d'action est que la luciférine (substrat) peut être oxydée pour émettre de la lumière en présence d'ATP et de luciférase. Lorsque la fluorescéine est en excès, le nombre quantique de lumière produite est égal aux concentrations de luciférase qui étaient corrélées positivement (voir la figure ci-dessous). Des plasmides portant le gène codant pour la luciférase (Luc) ont été transfectés dans des cellules et introduits dans des animaux d'étude tels que des rats et des souris.

La D-luciférine est également couramment utilisée dans les études in vitro, notamment l'analyse des niveaux de luciférase et d'ATP, l'analyse des gènes rapporteurs, le séquençage à haut débit et divers tests de contamination. Il existe trois formes de produit : la D-luciférine (acide libre), le sel de D-luciférine (sel de sodium et sel de potassium). La principale différence réside dans la solubilité : solubilité dans l'eau de la première et solubilité du système tampon. Ils sont faiblement solubles sauf dans les bases faibles telles que les faibles concentrations de solutions de NaOH et de KOH. Soluble dans le méthanol et le DMSO ; ce dernier peut être facilement dissous dans l'eau ou un tampon, facile à utiliser.

Caractéristiques

  • Pas de radiation, presque inoffensif pour les organismes vivants.
  • Bioluminescence, sans source lumineuse d'excitation.
  • Tellement sensible qu’on peut le détecter dans quelques centaines de cellules.
  • Bonne pénétration, une profondeur de tissu de 3 à 4 cm peut encore être détectée.
  • Rapport signal/bruit élevé, signal de fluorescence puissant et bonne anti-interférence.

Applications

  • Dans l'expérience de tumorigenèse chez la souris nude, la croissance tumorale a été observée sans invasion en temps réel, sans mesure de stripping tumoral.
  • Pour tester l’effet de l’administration sur la croissance tumorale ou les métastases, le substrat de fluorescéine peut être complètement éliminé en 3 heures, sans interférence avec l’expérience du médicament.
  • La localisation et la distribution de cellules étrangères chez les animaux ont été détectées.
  • Le gène cible ou le promoteur du gène cible est fusionné au gène de la luciférase pour détecter les changements dans l'expression génique pendant le traitement médicamenteux ou la progression de la maladie.
  • Suivi de la transplantation, de la survie et de la prolifération des cellules souches ; Suivi de la distribution et de la migration des cellules souches in vivo.

Caractéristiques

synonyme anglais Sel de potassium de l'acide (S)-4,5-dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylique; D-Luciférine luciole, sel de potassium
N° CAS 115144-35-9
Formule C11H7N2O3S2K
Poids moléculaire 318,42 g/mol
Apparence Poudre jaune clair
Solubilité Soluble dans l'eau (60 (mg/ml)

Composants

Composants N° Nom 40902ES01 40902ES02 40902ES03 40902ES08
40902 D-Luciférine, sel de potassium 100 mg 500 mg 1 g 5g


Chiffres

Cité dans « Un nouvel inhibiteur allostérique de la phosphoglycérate mutase 1 supprime la croissance et les métastases du cancer du poumon non à petites cellules », Cell Metab.2019;30(6):1107-1119

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Citations et références :

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Storage

The product is shipped with dry ice and can be stored at -15℃ ~ -25℃ for 1 year.

FAQ

There is no difference. The three are merely variations in naming by different companies, and they are all compounds (S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2 -thiazoline-4-carboxylic acid
Besides being used for in vivo imaging, fluorescent dye products are also employed in other applications involving luciferase, such as in vitro reporter gene assays, microbial/viral monitoring, pyrosequencing, etc.
Sodium fluorescein: It can be used for cell permeability testing. The permeability of the pigment can be determined by measuring the absorbance value at OD490. D-fluorescein sodium salt: Used for in vivo imaging and reporter gene systems. It is detected through a cold luminescence module and does not require excitation light stimulation.
The main differences among the three are as follows:
1) Solubility: The salt form is easily soluble in water. The solubility of potassium salt is 60mg/ml, and that of sodium salt is 100mg/ml. Free acid is not easily soluble in water. It can be dissolved by a weak alkaline solution of sodium bicarbonate, and its solubility in methanol is 10mg/ml, and in DMSO is 50mg/ml.
2) Toxicity: The salt form is more convenient to use during the process, especially in in vivo imaging experiments, as it can dissolve in water and the reaction toxicity will be smaller (Fluorescein is a low-molecular-weight organic compound composed of phenylthiazole and thiazole carboxyl group, with low toxicity).
3) Usage effect: There is no significant difference. In in vivo experimental studies, the usage rate of potassium salt is higher.
It has an impact. The purity is above 99%, with a good level of 99%. For 99% pure fluorescein, there is 1% solid impurity. If this 1 gram of impurity is dissolved in 25 ml of buffer solution (this dilution ratio is the standard dilution method for in vivo imaging experiments), the concentration of the impurity at this time is 0.4 g/L. Assuming the molecular weight of the impurity is 1000 g/mol, then the molar concentration of the impurity is 400 μM. This concentration may inhibit the action of certain enzymes in the cells and may reduce the experimental effect or cause harm to the animals.
The powder should be stored in a dark place at -20 or -70 degrees Celsius. Its validity period is at least one year.
D-fluorescein (D-Luciferin) is a commonly used substrate for luciferase. Its mechanism of action is that under the action of ATP and luciferase, the fluorescent substance (the substrate) can be oxidized and emit light. When there is an excess of fluorescent substance, the number of photons produced is positively correlated with the concentration of luciferase.
2. Native coelenterazine is an action substrate for various luciferases such as sea kidney luciferase (Rluc) and Gaussia luciferase (Gluc).
Recommended instruments:
1. Instruments with a biochemiluminescence detection module. The light produced by luciferin can be detected by a photometer or a scintillation counter. Common in vivo imaging instruments: such as the IVIS® Lumina small animal in vivo imaging system, the In-Vivo Xtreme multi-mode small animal in vivo imaging instrument from Bruker, Germany.
2. Multi-functional microplate readers: It is necessary to confirm with the instrument manufacturer whether it is a specific biochemiluminescence detection module (note: cannot use a fluorescence microscope).
Fluorescein is a small molecule with excellent water solubility and lipid solubility. It can easily penetrate the cell membrane and the blood-brain barrier.
Either one is fine. Intraperitoneal injection has a slower diffusion rate and the light emission lasts longer; intravenous injection has a faster diffusion rate, but the light emission lasts for a very short period of time.
Intraperitoneal injection (i.p.), with a fluorescein concentration of 150 mg/kg per kg of body weight. Taking a 20g C57 mouse as an example, the dosage for each mouse for one test: 150 mg/kg × 20g = 3mg, 100mg ÷ 3mg = 33 mice. This is for reference only. The specific dosage should be based on the reagent and without any loss.
Generally speaking, potassium d-fluorescein does not cause any toxic effects on animals.
There is no such information.
This product undergoes in vitro imaging. The ATP and magnesium ions required for this process need to be achieved through the cell culture medium. Therefore, a cell culture medium containing ATP and magnesium ions needs to be added to dilute the probe;
2. The cells themselves also contain a certain amount of ATP and magnesium, which can promote the reaction. In most cases, the ATP and magnesium contained in the cells are sufficient for the reaction of D-fluorescein salt, but the content varies depending on the type of cells. You can first try using a culture medium without additional ATP and magnesium, and conduct the experiment normally to see the results.
Chemiluminescence, no excitation wavelength required. The detection wavelength for firefly luciferin is 560 nm. The detection wavelength for sea kidney luciferin is 465 nm.
It can pass through the blood-brain barrier, the placental barrier and the blood test barrier, and also enter living cells.
The recommended concentrations are derived from the literature:
1) Injection method: It can be done through intraperitoneal injection or tail vein injection.
2) Injection volume: The scientific approach is to evaluate the injection dose based on the kinetic curve. The initial attempted injection dose is: 150mg substrate/kg of mouse body weight. Therefore, the purchase quantity can be calculated according to the above method: If there are 10 mice, 22 - 25g, then 33 - 37.5mg of substrate is required.
Approximately 3 minutes after intraperitoneal injection of fluorescein into mice, cells expressing luciferase began to emit light. The intensity reached a stable peak after 10 minutes, and this peak lasted for about 10 - 15 minutes before gradually diminishing. Detection can be conducted within 10 - 15 minutes after the injection. This is for reference only. It is recommended to conduct a preliminary experiment to establish the kinetics curve of luciferase, thereby determining the optimal time for signal detection and the signal plateau period.
To successfully conduct the in vivo imaging experiment, the following conditions are required: The target tissue or cells must express the luciferase gene; the injection of the luciferin substrate must be successful; and the thickness of the tissue at the luminescent site is also a factor. If the experiment fails, the reasons can be investigated from these aspects: whether the luciferase gene is expressed, whether the luciferin substrate was injected correctly, and whether the luminescent site is deep.

Citations

Documents

Brochure
In_vivo_imaging_Leaving_Tumor_Cells_Nowhere_to_Hide.pdf

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