Description
Chez les eucaryotes, l'ARNm subit des modifications post-transcriptionnelles, formant une structure spéciale à l'extrémité 5' appelée structure de coiffe. Cette structure joue un rôle important dans la stabilité, le transport et la traduction de l'ARNm. L'enzyme de coiffage du virus de la vaccine est une enzyme efficace qui catalyse la formation de la structure de coiffe. Elle se compose de deux sous-unités, D1 et D12, et possède une activité ARN triphosphatase, une activité guanylyltransférase et une activité guanine N7-méthyltransférase. Elle peut attacher la structure de coiffe 7-méthylguanosine (m7Gppp) à l'extrémité 5' de l'ARN (m7Gppp5'N).
L'enzyme de coiffage du virus de la vaccine, en présence de tampon de coiffage (tampon de coiffage), de guanosine triphosphate (GTP), de S-adénosylméthionine (SAM) et d'autres composants à des concentrations appropriées, est capable de coiffage de l'ARN en une heure tout en garantissant la bonne directionnalité.
Ce kit utilise le principe d'un test ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) en sandwich à double anticorps pour détecter la quantité résiduelle d'enzyme de coiffage du virus de la vaccine. L'échantillon standard et les échantillons de test de l'enzyme de coiffage du virus de la vaccine sont ajoutés à une plaque enzymatique pré-enduite d'anticorps anti-enzyme de coiffage du virus de la vaccine (36709-A), suivis de l'ajout d'un anticorps de détection de l'enzyme de coiffage marqué à la biotine dilué (36709-C), et enfin de la streptavidine-HRP (SA-HRP) (36709-D). Cela forme le complexe anticorps+antigène+anticorps-biotine+SA-HRP. Après lavage, une solution de substrat TMB (36709-H) est ajoutée pour développer la couleur.
Sous la catalyse de l'enzyme HRP, le TMB passe de l'incolore au bleu et, sous l'action de la solution d'arrêt (36709-I), il devient finalement jaune. L'intensité de la couleur jaune est positivement corrélée à la quantité d'enzyme de coiffage du virus de la vaccine détectée dans l'échantillon.
Composants
| Non. | Nom | 36709ES48 | 36709ES96 |
| 36709-A | Enzyme de coiffage anti-vaccinale enrobée bandelettes de microtitration | 48 T | 96 T |
| 36709-B* | Standard: Enzyme de coiffage de la vaccine | 1 ampoule | 2 ampoule |
| 36709-C | Détection Anticorps : Biotine-conjugué Anticorps | 60 μL | 120 μL |
| 36709-D | Streptavidine-HRP | 20 μL | 40 μL |
| 36709-F | Tampon de dilution 1 | 25 mL | 45 mL |
| 36709-F | Concentration de tampon de lavagetaux (20×) | 25 mL | 50 mL |
| 36709-G | Tampon de dilution 2 | 15 mL | 30 mL |
| 36709-H | Substrat TMB | 8 mL | 15 mL |
| 36709-I | Arrêter la solution | 5 mL | 10 mL |
| 36709-J | Scellant à plaques | 3 chacun | 5 chacun |
*La norme 36709-B est une poudre lyophilisée.
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