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La luciférase de luciole est une protéine d'un poids moléculaire d'environ 61 kDa, qui peut catalyser l'oxydation de la luciférine en oxyluciférine en présence d'ATP, d'ions magnésium et d'oxygène. Elle émet une bioluminescence d'une longueur d'onde d'environ 560 nm. La luciférase de renilla est une protéine d'un poids moléculaire d'environ 36 kDa, qui peut catalyser l'oxydation de la cœlentérazine en cœlentéramide en présence d'oxygène, et émet une longueur d'onde de 480 nm pendant le processus d'oxydation. à propos de la bioluminescence. Les deux bioluminescences peuvent être mesurées par chimioluminescence. Le principe de détection est illustré dans la figure 1 :
Figure 1 : Schéma du test de la luciférase de Firefly et Renilla
En général, le 5´UTR ou le promoteur du gène cible est cloné en amont de la luciférase de luciole, ou le 3´UTR est cloné en aval de la luciférase de luciole, et l'effet de régulation transcriptionnelle du promoteur ou de l'élément régulateur est détecté en détectant la quantité de luciférase de luciole. La luciférase de Renilla a été utilisée comme contrôle interne pour éliminer les différences de nombre de cellules, d'efficacité de transfection, etc. Le kit d'analyse du gène rapporteur de la luciférase double utilise la luciférine comme substrat pour détecter l'activité du gène rapporteur de la luciférase de luciole, puis utilise la coelentérazine comme substrat pour détecter la luciférine de Renilla tout en éteignant la réaction de fluorescence. Activité du gène rapporteur enzymatique. Le kit présente les caractéristiques d'une sensibilité élevée.
Caractéristiques
Capacité de lyse améliorée : capable de lyser complètement la grande majorité des types de cellules.
Signal plus fort : détection précise de l’expression d’un promoteur faible.
Sensibilité plus élevée : détectable jusqu'à 10 à 20 picomoles de molécules de luciférase.
Plage linéaire plus large : la plage de détection linéaire dépasse 8 ordres de grandeur de la concentration enzymatique.
Applications
Vérification des interactions des miRNA avec les 3'UTR des gènes cibles
Vérification des interactions lncRNA-miRNA
Vérification de la régulation des facteurs de transcription dans la région promotrice
Analyse des voies de signalisation
Analyse de l'activité SNP
Caractéristiques
| Formulaire | liquide |
| Luciférase | Luciole et Renilla |
| Demi-vie du signal | 30 minutes |
| Nombre de composants du produit | 5 |
| Flux de travail | Deux Sétape |
Composants
| Composants N° | Nom | 11402ES60 | 11402ES80 |
| 11402-A | Lysats cellulaires | 20 ml | 10×20 mL |
| 11402-B | Tampon de luciférase Firefly | 10 ml | 10×10 mL |
| 11402-C | Substrat de luciférase de luciole (50 ×) | 200 μL | 10×200 μL |
| 11402-D | Tampon de luciférase Renilla | 10 ml | 10×10 mL |
| 11402-F | Substrat de luciférase Renilla (50 ×) | 200 μL | 10×200 μL |
Expédition et stockage
Les produits du kit d'analyse du gène rapporteur de la double luciférase doivent être conservés à -15℃ ~ -25℃ pour 1 année.
Chiffres
Figure 1. YEASEN (Chat#:11402) a une intensité de fluorescence comparable à celle de Brand P.
Chiffre2. YFACILITER (Chat#: : 11402) Les réactifs de détection interagissent avec la luciférase pour obtenir une intensité de luminescence optimale. Après l'ajout du substrat de luciférase de Renilla, la bioluminescence de la luciférase de luciole est éteinte : elle peut être pratiquement complètement éteinte.
Documents:
Fiche de données de sécurité
Manuels
Citations et références :
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FAQ
2. In vitro reporter assays require cell lysis to homogenize samples, overcoming transfection heterogeneity, uneven substrate permeability, and signal variation. In vitro reporter assays are highly quantitative and sensitive, requiring ATP and oxygen. Cell lysis fully releases expressed luciferase to optimize the reaction; since intracellular oxygen is limited, omitting lysis leads to signal reduction (some lysis buffers include optimized additives like ATP to boost signal). Therefore, cell lysis ensures superior signal in in vitro assays. 3. In vivo imaging instruments possess high sensitivity and power capable of penetrating skin and tissue, enabling strong signal detection without cell lysis.
Citations
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