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Ce produit est une endonucléase de restriction de type II dérivée de la protéine recombinante codée par le gène BspQI dans Bacillus sphaericus exprimée par E.coli. Sa séquence de reconnaissance est 5'-GCTCTTCN1/N4-3'. Utilisé pour digérer les plasmides afin de préparer des fragments d'ADN linéarisés à terminaison poly (A/T/G/C) pour obtenir des extrémités cohésives spécifiques. Ce produit est fabriqué conformément aux exigences des procédés GMP et fourni sous forme liquide.
Fonctionnalité
- Les enzymes de restriction de type IIS reconnaissent les séquences d'ADN asymétriques et effectuent le clivage en dehors de leur séquence de reconnaissance
- Site de coupure de l'enzyme de restriction : GCTCTTC (1/4)
- Digestion de l'ADN pour obtenir des extrémités collantes spécifiques
- Isolé à partir d'une source recombinante
- Testé pour l'absence d'endonucléases, d'exonucléases, d'ARNases
Application
- Digérer le plasmide pour préparer un fragment d'ADN linéarisé à la fin de Poly (A/T/C/G) ;
- Linéariser le modèle plasmidique avant la transcription in vitro
- Résumé des restrictions
Spécification
| Hôte d'expression | Escherichia coli recombinant avec le gène BspQI |
| Température de réaction | 50℃ |
| Mémoire tampon de stockage | 20 mM de Tris-HCl, 0,5 M de KCl, 0,1 mM d'EDTA, 1 mM de DTT, 0,1 % de Triton X-100, 50 % de glycérol |
| Définition de l'unité | 1 unité : La quantité d'enzyme nécessaire pour digérer 1 μg de λDNA en 1 h à 50 ℃ dans un système de 50 μL |
Composants
| Composants N° | Nom | 10664ES76 (500 U) | 10664ES86 (2 500 U) | 10664ES92 (10 KU) | 10664ES98 (100 KU) |
| 10664 | BspQI de qualité GMP (10 U/μL) | 50 μL | 250 μL | 1 ml | 10 ml |
Expédition et stockage
Le produit est expédié avec de la glace sèche et peut être stocké à -15℃ ~ -25℃ pour un année.
Chiffres
Figure 1. Les performances du YEASEN BspQI sont supérieures.
Dans un système de réaction de 50 μL, 1 μg de λDNA a été traité avec la quantité correspondante de BspQI (incuber à 50 °C pendant 60 min, puis incuber à 80 °C pendant 20 min pour inactiver BspQI). Ensuite, 20 μL de la solution de réaction ont été chargés.
M: Marqueur ADN
C : Le groupe témoin sans traitement BspQI
Storage
FAQ
1. The cut site should be such that the 5' end protrudes or is flush with the end. The presence of the 3' protruding end will increase the generation of false by-products during in vitro transcription (IVT) from the template body.
2. The recognition sequence of the restriction enzyme cleavage site should be as long as possible; the longer the recognition sequence, the less likely it is to appear in the gene fragment.
3. IIS-type endonucleases are the preferred enzymes for linearizing plasmids in vaccine development, as their cleavage sites are outside the recognition sequence, ensuring the integrity of the designed poly(A) tail. After linearizing DNA templates using IIS-type endonucleases, no "scars" will remain, and no unnecessary nucleotides will be added during the IVT process.
4. The endonucleases meet the pharmaceutical production grade requirements (GMP, without animal-derived components, etc.)
At present, for most mRNA development projects, especially vaccine projects, the endonucleases used for linearization of plasmids are still BspQI, BsaI, and XbaI. Among them, BspQI is the most frequently used. It is estimated that there is a certain relationship with the previous designed plasmid sequences from abroad. Of course, it is not limited to these enzymes; we have also encountered cases where other enzymes were used for linearization.
Citations
Applications
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Enquête
FAQ
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