Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR Master Mix (High Rox) es una presolución para la amplificación cuantitativa por PCR en tiempo real 2×, que presenta una alta intensidad de fluorescencia, alta sensibilidad y especificidad, y un alto rendimiento de amplificación. El componente principal, Hieff UNICON™ Taq DNA Polymerase, se inicia en caliente mediante el método de anticuerpos, lo que puede inhibir eficazmente la amplificación no específica causada por la hibridación de cebadores durante la preparación de la muestra. Al mismo tiempo, la fórmula agrega factores para mejorar la eficiencia de amplificación de la reacción de PCR y facilitadores para igualar la amplificación de genes con diferentes contenidos de GC (30~70%), de modo que la PCR cuantitativa pueda obtener una buena relación lineal en una amplia gama de regiones cuantitativas. El producto utiliza la reacción de cambio de color mixto de diferentes tintes para monitorear la operación de pipeteo, lo que reduce eficazmente la aparición de errores de pipeteo.
Características
Seguimiento del pipeteo: reduzca el riesgo de errores de adición o de omisión
Excelente amplificación: Buena linealidad en un amplio rango lineal
Alta precisión: puede distinguir con precisión plantillas con una diferencia de concentración de 2 veces
Buena repetibilidad: pequeña variabilidad entre pocillos en pocillos replicados, lo que resulta en una mejor repetibilidad
Estable y confiable: el sistema de reacción se puede almacenar a temperatura ambiente durante 24 horas y el producto permanece inalterado después de 20 ciclos de congelación y descongelación.
Aplicaciones
Análisis de las diferencias en la expresión genética
Análisis cuantitativo absoluto
Presupuesto
| Concentración | 2 ×(Mezcla de qPCR) |
| Método de detección | Método de teñido |
| Método de PCR | PCR cuantitativa |
| Polimerasa | Taq ADN polimerasa |
| Tipo de muestra | ADN |
| Equipo de aplicación | Biosystems 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900HT, 7900HT Fast, StepOne, StepOnePlus y otros instrumentos de PCR cuantitativa de fluorescencia que requieren la adición de altas concentraciones de colorante de referencia ROX |
| Tipo de producto | Premezcla para PCR cuantitativa de fluorescencia en tiempo real |
| Aplicar a (solicitud) | Expresión genética |
Componentes
| Componentes No. | Nombre | 11190ES03 | 11190ES08 | 11190ES60 |
| 11190-A | Alto UNICON™ PCR cuantitativa con GPS a color Mezcla maestra (Alto Rox) | 1 ml | 5 x 1 ml | 100×1 ml |
| 11190-B | Tampón de dilución 10× | 1 ml | 1 ml | 20 x 1 ml |
Envío y almacenamiento
Este producto debe almacenarse entre -25 y -15 ℃ durante 1 año.
Cifras
Figura 1. Se pueden obtener resultados confiables dentro del rango dinámico.
Utilizando 2 µL de plantillas de plásmidos con un gradiente de 10^1-10^7, se amplificaron los genes relacionados. Hieff UNICON™ La mezcla maestra ColorGPS puede detectar eficazmente un rango de cantidad de plantilla de 7 órdenes de magnitud, logrando una buena linealidad dentro de un amplio rango lineal.
Cifra2. Puede distinguir con precisión diferencias de concentración de plantilla de 2 veces.
Utilizando 2 µL de plásmido diluido en un gradiente doble como plantilla, se amplificaron los genes relacionados. Hieff UNICON™ La mezcla maestra ColorGPS puede resolver con precisión las diferencias de concentración de plantillas.
Cifra3Se observa una pequeña variabilidad entre pocillos, lo que muestra una mejor repetibilidad.
Utilizando decenas de copias del plásmido como plantilla, se realizó la amplificación con diferentes reactivos cuantitativos fluorescentes según los procedimientos especificados en sus respectivos manuales de instrucciones. Los valores de desviación estándar indican que, en comparación con otros reactivos de transcripción inversa, el nuevo producto presenta menores diferencias entre pocillos replicados y mejor repetibilidad.
Cifra4. Más flexible, adecuado para procedimientos estándar o rápidos.
En el procedimiento estándar, el tiempo de desnaturalización y el tiempo de extensión se establecen en 10 segundos y 30 segundos, respectivamente, mientras que en el procedimiento rápido, el tiempo de desnaturalización y el tiempo de extensión se establecen en 3 segundos y 10 segundos, respectivamente, para detectar los valores de Ct correspondientes a 10 genes objetivo.Los resultados muestran que los valores de Ct obtenidos con el nuevo producto tanto en los procedimientos estándar como en los rápidos tienen una fuerte correlación y el nuevo producto puede lograr buenos resultados utilizando el procedimiento rápido.
Cifra5Una vez preparado el sistema de reacción, puede permanecer estable a temperatura ambiente durante 24 horas.
Utilizando diferentes genes de ratón, células 293 humanas y Arabidopsis thaliana como objetivos, después de preparar el sistema de reacción, se colocó en la oscuridad a diferentes temperaturas durante 24 horas antes de la detección. En comparación con el procesamiento inmediato, la diferencia de detección para diferentes genes no supera los 0,5 Ct, lo que indica que también se pueden obtener resultados estables con operaciones de larga duración.
Documentos:
Manuales
Storage
FAQ
For example, for 20 μL of cDNA stock solution, add 180 μL of sterile ultrapure water to dilute it 10 times, resulting in 200 μL of diluted template. Take 90 μL of the diluted template and add 10 μL of 10× Dilution Buffer, mix well, and then use it. You can choose not to do this, but it will not affect the result.
1)The instrument has not been calibrated for a long time or it is aging. Usually, the instrument needs to be calibrated once a year. It is necessary to have an instrument engineer perform the calibration or replace the aging components.
2)A 10 μL reaction system was used. The normal system is a 20 μL system. Using half of the normal system would result in an excessively low total concentration of Rox, increasing the probability of BadRox occurrence. It is recommended to conduct the experiment using the 20 μL system.
2)Is the length of the product too long? If the length of the product is set to 500bp or more, this situation may occur. It is recommended that during primer design, the length of the product be controlled within the range of 80-300bp.
3)Are the primers inappropriate? If the primers are not designed correctly, they need to be redesigned. If the primers are correctly designed but seem to be degraded, PAGE electrophoresis can be used to check the integrity of the primers.
4)Template degradation: Prepare the template anew and repeat the experiment.
The melting curve shows that the melting peak shape of NTC does not overlap with that of the corresponding gene, and the TM value of NTC is smaller than that of the corresponding gene. In this case, the product corresponding to NTC is a primer dimer. If the melting curve peak shape of the corresponding gene is a single peak, the collection of the signal of the related gene will not be affected.
The melting curve shows that the melting peak shape of NTC overlaps with that of the corresponding gene. In this case, the product corresponding to NTC is likely to be the product of the corresponding gene. The system has been contaminated. We need to check one by one whether the water, primers, or reagents have been contaminated. If none of them have been contaminated, it might be aerosol contamination. Based on the obtained amplification data, the ΔCT value is calculated to determine whether the contamination has a significant impact on the system. If ΔCT ≥ 5, it indicates that the contamination has a minor effect and can be ignored.
Improve the accuracy of the pipette's aspiration. Pipettes usually need to be calibrated regularly, once a year.
The overlapping peaks in the melting curve are located to the right of the main peak.
1). It is possible that the non-specific amplification occurred due to poor specificity of the primers. The primers need to be redesigned.
2). It is possible that the template DNA was contaminated with genomic DNA. It is recommended to use an RNA extraction kit that removes the genomic DNA for RNA extraction, or to add a step of removing the genomic DNA during reverse transcription to reprepare the cDNA template.
Citations
Documents
| Brochure |
|---|
| qPCR_solutions.pdf |
Applications
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Consulta
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