Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (no ROX) _ 11188ES
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Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (no ROX) _ 11188ES
Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (no ROX) _ 11188ES
Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR Master Mix (No Rox) es una presolución para la amplificación cuantitativa por PCR en tiempo real 2×, que presenta una alta intensidad de fluorescencia, alta sensibilidad y especificidad, y un alto rendimiento de amplificación. El componente principal, Hieff UNICON™ Taq DNA Polymerase, se inicia en caliente mediante el método de anticuerpos, lo que puede inhibir eficazmente la amplificación no específica causada por la hibridación de cebadores durante la preparación de la muestra. Al mismo tiempo, la fórmula agrega factores para mejorar la eficiencia de amplificación de...

Color-Traceable qPCR: Zero Mispipetting

Frequently Bought Together

Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (no ROX) _ 11188ES

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YeasenSku: 11188ES03
Tamaño: 1 ml
Precio:
$40.00 $55.00
Existencias:
En stock

Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR Master Mix (No Rox) es una presolución para la amplificación cuantitativa por PCR en tiempo real 2×, que presenta una alta intensidad de fluorescencia, alta sensibilidad y especificidad, y un alto rendimiento de amplificación. El componente principal, Hieff UNICON™ Taq DNA Polymerase, se inicia en caliente mediante el método de anticuerpos, lo que puede inhibir eficazmente la amplificación no específica causada por la hibridación de cebadores durante la preparación de la muestra. Al mismo tiempo, la fórmula agrega factores para mejorar la eficiencia de amplificación de la reacción de PCR y facilitadores para igualar la amplificación de genes con diferentes contenidos de GC (30~70%), de modo que la PCR cuantitativa pueda obtener una buena relación lineal en una amplia gama de regiones cuantitativas. El producto utiliza la reacción de cambio de color mixto de diferentes colorantes para monitorear la operación de pipeteo, lo que reduce eficazmente la aparición de errores de pipeteo.

Características

Seguimiento del pipeteo: reduzca el riesgo de errores de adición o de omisión

Excelente amplificación: Buena linealidad en un amplio rango lineal

Alta precisión: puede distinguir con precisión plantillas con una diferencia de concentración de 2 veces

Buena repetibilidad: pequeña variabilidad entre pocillos en pocillos replicados, lo que resulta en una mejor repetibilidad

Estable y confiable: el sistema de reacción se puede almacenar a temperatura ambiente durante 24 horas y el producto permanece inalterado después de 20 ciclos de congelación y descongelación.

Aplicaciones

Análisis de las diferencias en la expresión genética

Análisis cuantitativo absoluto

Presupuesto

Concentración

2 ×(Mezcla de qPCR)

Método de detección

Método de teñido

Método de PCR

PCR cuantitativa

Polimerasa

Taq ADN polimerasa

Tipo de muestra

ADN

Equipo de aplicación

Bio-Rad CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ; MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4; Cepheid SmartCycler; Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2 s; Illumina Eco qPCR; Qiagen/Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000; Roche Applied Science LightCycler 480; Thermo Scientific PikoReal Cycler y otros instrumentos de PCR cuantitativa de fluorescencia que no requieren la adición del colorante de referencia ROX

Tipo de producto

Premezcla para PCR cuantitativa de fluorescencia en tiempo real

Aplicar a (solicitud)

Expresión genética

Componentes

Componentes No.

Nombre

11188ES03

11188ES08

11188ES60

11188-A

Alto UNICON™ PCR cuantitativa con GPS a color Mezcla maestra (Sin Rox)

1 ml

5 x 1 ml

100×1 ml

11188-B

Tampón de dilución 10×

1 ml

1 ml

20 x 1 ml

Envío y almacenamiento

Este producto debe almacenarse entre -25 y -15 ℃ durante 1 año.

Cifras

Figura 1. Se pueden obtener resultados confiables dentro del rango dinámico.

Utilizando 2 µL de plantillas de plásmidos con un gradiente de 10^1-10^7, se amplificaron los genes relacionados. Hieff UNICON™ La mezcla maestra ColorGPS puede detectar eficazmente un rango de cantidad de plantilla de 7 órdenes de magnitud, logrando una buena linealidad dentro de un amplio rango lineal.

Cifra2. Puede distinguir con precisión diferencias de concentración de plantilla de 2 veces.

Utilizando 2 µL de plásmido diluido en un gradiente doble como plantilla, se amplificaron los genes relacionados. Hieff UNICON™ La mezcla maestra ColorGPS puede resolver con precisión las diferencias de concentración de plantillas.

Cifra3Se observa una pequeña variabilidad entre pocillos, lo que muestra una mejor repetibilidad.

Utilizando decenas de copias del plásmido como plantilla, se realizó la amplificación con diferentes reactivos cuantitativos fluorescentes según los procedimientos especificados en sus respectivos manuales de instrucciones. Los valores de desviación estándar indican que, en comparación con otros reactivos de transcripción inversa, el nuevo producto presenta menores diferencias entre pocillos replicados y mejor repetibilidad.

Cifra4. Más flexible, adecuado para procedimientos estándar o rápidos.

En el procedimiento estándar, el tiempo de desnaturalización y el tiempo de extensión se establecen en 10 segundos y 30 segundos, respectivamente, mientras que en el procedimiento rápido, el tiempo de desnaturalización y el tiempo de extensión se establecen en 3 segundos y 10 segundos, respectivamente, para detectar los valores de Ct correspondientes a 10 genes objetivo.Los resultados muestran que los valores de Ct obtenidos con el nuevo producto tanto en los procedimientos estándar como en los rápidos tienen una fuerte correlación y el nuevo producto puede lograr buenos resultados utilizando el procedimiento rápido.

Cifra5Una vez preparado el sistema de reacción, puede permanecer estable a temperatura ambiente durante 24 horas.

Utilizando diferentes genes de ratón, células 293 humanas y Arabidopsis thaliana como objetivos, después de preparar el sistema de reacción, se colocó en la oscuridad a diferentes temperaturas durante 24 horas antes de la detección. En comparación con el procesamiento inmediato, la diferencia de detección para diferentes genes no supera los 0,5 Ct, lo que indica que también se pueden obtener resultados estables con operaciones de larga duración.

Ddocumentos:

Manuales

11188_Manual_Versión EN20241218.pdf

Storage

This product should be stored at -25~-15℃ for 18 months.

FAQ

Please refer to the "YiSheng Biotechnology YiSheng Biotechnology Dye Method Fluorescence Quantitative PCR Mix Selection Table" for details. Click here to learn more and help you choose the appropriate reagents.
For molecular enzyme reagents, simply invert and mix them together, then perform a gentle centrifugation. It is not recommended to vigorously shake to mix them.
Refer to the manual. Ultimately, it is necessary to ensure that after being mixed with the template, the volume is exactly 1×. For example, for 20 μL of cDNA stock solution, add 180 μL of sterile ultrapure water to dilute it 10 times, resulting in 200 μL of diluted template. Take 90 μL of the diluted template and add 10 μL of 10× Dilution Buffer, mix well, and then use it. You can choose not to do this, but it will not affect the result.
You can choose to use the cDNA stock solution or dilute it. Just make sure that the Ct value of the gene you want falls within the range of 15 to 30. Generally, for every 10-fold dilution of cDNA, the Ct value increases by 3.3.
Store in a dark place and the reaction system must not be left open. These two points are essential. It can be placed in a 4℃ refrigerator or at room temperature for 24 hours. Before using, gently shake and centrifuge the sample before loading it onto the instrument. Before loading, carefully check if the tubes or plates have been contaminated.
When designing primers, it is best to cross introns. The design method can refer to "Enjoyable! A single article to understand qPCR primer design, a must-have skill for experimental experts!" Also, validated primers can be selected. The selection method can refer to "Where to find ready-made qPCR primer sequences?"
The possible reasons are as follows:
1. The instrument has not been calibrated for a long time or it is aging. Usually, the instrument needs to be calibrated once a year. It is necessary to have an instrument engineer perform the calibration or replace the aging components.
2. A 10 μL reaction system was used. The normal system is a 20 μL system. Using half of the normal system would result in an excessively low total concentration of Rox, increasing the probability of BadRox occurrence. It is recommended to conduct the experiment using the 20 μL system.
The specificity of qPCR products can usually be determined through the melting curve. If it is still necessary to determine the products through gel electrophoresis, the qPCR product can undergo electrophoresis. Electrophoresis requires Loading Buffer, and the product cannot be directly loaded for electrophoresis.
1. Confirm whether the signal acquisition function is enabled in the program. If a two-step method is used, the signal acquisition should be set during the annealing extension stage.
2. Is the length of the product too long? If the length of the product is set to 500bp or more, this situation may occur. It is recommended that during primer design, the length of the product be controlled within the range of 80-300bp.
3. Are the primers inappropriate? If the primers are not designed correctly, they need to be redesigned. If the primers are correctly designed but seem to be degraded, PAGE electrophoresis can be used to check the integrity of the primers.
4.Template degradation: Prepare the template anew and repeat the experiment.
The analysis is conducted by observing the melting curve. The melting curve shows that the melting peak shape of NTC does not overlap with that of the corresponding gene, and the TM value of NTC is smaller than that of the corresponding gene. In this case, the product corresponding to NTC is a primer dimer. If the melting curve peak shape of the corresponding gene is a single peak, the collection of the signal of the related gene will not be affected. The melting curve shows that the melting peak shape of NTC overlaps with that of the corresponding gene. In this case, the product corresponding to NTC is likely to be the product of the corresponding gene. The system has been contaminated. We need to check one by one whether the water, primers, or reagents have been contaminated. If none of them have been contaminated, it might be aerosol contamination. Based on the obtained amplification data, the ΔCT value is calculated to determine whether the contamination has a significant impact on the system. If ΔCT ≥ 5, it indicates that the contamination has a minor effect and can be ignored.
It indicates the presence of genomic DNA contamination. It is recommended to use an RNA extraction kit that removes the genome for RNA extraction or during reverse transcription by adding a step to remove the genome. Alternatively, when designing the primers, a design across introns should be adopted.
1. If the CT value is less than 30, but the repeatability is very poor, what should we do? Improve the accuracy of sample addition. Avoid adding small volumes and reduce the error of addition. This can be achieved by preparing a large sample system, for example, mixing primers, water, and qPCR mix into a large system or using the method of mixing primers and water into a large system. The large system needs to be mixed evenly. Improve the accuracy of the pipette's aspiration. Pipettes usually need to be calibrated regularly, once a year.
2. What if CT is ≥ 30 but the repeatability is very poor? At this point, due to the low abundance of the effective template, the randomness of collisions between the template and the primers increases, thereby causing a greater difference between the replicons. It is recommended to try adding 2-3 replicons, and then eliminate the data with large differences for data analysis.
The overlapping peaks in the melting curve are located to the left of the main peak. This might be a situation caused by primer dimerization. One possible solution could be to increase the annealing temperature, reduce the primer concentration, or redesign the primers. The overlapping peaks in the melting curve are located to the right of the main peak. a. It is possible that the non-specific amplification occurred due to poor specificity of the primers. The primers need to be redesigned. b. It is possible that the template DNA was contaminated with genomic DNA. It is recommended to use an RNA extraction kit that removes the genomic DNA for RNA extraction, or to add a step of removing the genomic DNA during reverse transcription to reprepare the cDNA template.

Citations

Documents

Brochure
Comprehensive_And_Professional_qPCR_Solution.pdf

Applications

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Consulta

Preguntas frecuentes

El producto es solo para fines de investigación y no está destinado a uso terapéutico o diagnóstico en humanos o animales. Los productos y el contenido están protegidos por patentes, marcas comerciales y derechos de autor propiedad de Yeasen Biotechnology. Los símbolos de marca comercial indican el país de origen, no necesariamente el registro en todas las regiones.

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Yeasen se dedica a la ciencia ética y cree que nuestra investigación debe abordar cuestiones críticas al tiempo que garantiza la seguridad y los estándares éticos.