Dette produkt er en bakteriofag T7 RNA-polymerase afledt af rekombinant proteinekspression i Escherichia coli. Det katalyserer 5'→3'-syntesen af RNA på dobbeltstrenget DNA fra dets T7-promotorsekvens (5'-TAATACGACTCACTATAG*-3') og bruger NTP'er som substrater. DNA'et med dobbeltstrengede lineære stumpe ender eller 5'-fremspringende ender kan bruges som skabeloner for T7 RNA-polymerase, så lineariserede plasmider og PCR-produkter kan bruges som skabeloner til in vitro syntese af RNA.
Bemærk: G* er den første base af RNA-transkriptet.
Dette produkt er produceret i overensstemmelse med GMP-reglerne og leveres i flydende form.
Feature
- Syntetisere lange transkripter og korte transkripter, RNA kan produceres 100-200 μg med 1 μg DNA skabelon
- Højere udbytte og nem at betjene
- Lavere endotoksiner
- Testet for fravær af endonukleaser, exonukleaser, RNaser
Anvendelse
- Radioaktivt mærket RNA-probepræparation
- RNA-generering til studier af RNA-struktur, bearbejdning og katalyse
- Ekspressionskontrol via anti-sense RNA
- mRNA, sgRNA syntese
Specifikation
| Kilde | Udtrykt i E. coli med et rekombinant T7 RNA-polymerase-gen |
| Optimal temperatur | 37℃ |
| Opbevaringsbuffer | 50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0,1 % Triton X-100, 50 % (v/v) glycerin, pH 7,9 ved 25℃ |
| Enhedsdefinition | Den mængde enzym, der kræves for at inkorporere 1 nmol [3H] GMP i det syreuopløselige bundfald inden for 1 time ved 37°C og pH 8,0 er defineret som 1 enhed. |
Kvalitet
| COA varer | Standard |
| Aktivitet | 250-300U/μL |
| Protein koncentration | ≥0,5 mg/ml |
| Renhed | ≥95 % |
| Endotoksin | <20 EU/mg |
| Resterende protease | Negativ |
| Resterende exonuklease | Negativ |
| Resterende Nickase | Negativ |
| Resterende RNase | Negativ |
| E. coli værtsprotein | <50 ppm |
| E.coli vært DNA | <10 fg/U |
| Mycoplasma DNA | Negativ |
Komponenter
| Komponenter nr. | Navn | 10625ES10 (10 KU) | 10625ES60 (100 KU) | 10625ES86 (2.500 KU) | 10625ES99 (100 MU) |
| 10625 | T7 RNA Polymerase GMP-kvalitet (250 U/μL) | 40 μL | 400 μL | 10 ml | 400 ml |
Forsendelse og opbevaring
T7 RNA Polymerase GMP-kvalitetsprodukter sendes med tøris og kan opbevares ved -15℃ ~ -25℃ i et år.
Figurer
Figur 1. Standard-RNA blev syntetiseret in vitro under anvendelse af T7 RNA-syntesesæt.
Reaktionen blev inkuberet i PCR-instrument ved 37 ℃ i 2 timer og derefter oprenset med magnetiske perler (kat #12602). Udbytteresultatet blev analyseret med NanoDrop spektrofotometer som vist i figur 1.
Figur 2. Transskriptionsdemonstrationen af RNA med forskellige længder ved hjælp af T7-kit i henholdsvis elektroforetogrammet (figur 2A), kapillærelektroforesediagrammet (figur 2B) og kromatogrammet (figur 2C)
Figur 3. Syntese af capped RNA in vitro.
Reaktionen blev inkuberet i PCR-instrument ved 37 ℃ i 2 timer og derefter oprenset med magnetiske perler (kat #12602). Udbytteresultatet blev analyseret med NanoDrop spektrofotometer som vist i figur 3A. Integritetsresultatet blev analyseret ved kapillarelektroforese som vist i figur 3B.
10625_Manual_HB221111_DA.pdf
Citater og referencer:
Storage
FAQ
1)ptimizing the sequence immediately upstream of the template's 3' end;
2)Controlling the IVT yield, as excessively high transcription levels tend to increase the frequency of self-extension events.
Citations
Documents
Du kan også lide
Forespørgsel
FAQ
Produktet er kun til forskningsformål og er ikke beregnet til terapeutisk eller diagnostisk brug hos mennesker eller dyr. Produkter og indhold er beskyttet af patenter, varemærker og ophavsrettigheder ejet af Yeasen Biotechnology. Varemærkesymboler angiver oprindelseslandet, ikke nødvendigvis registrering i alle regioner.
Visse applikationer kan kræve yderligere tredjeparts intellektuelle ejendomsrettigheder.
Yeasen er dedikeret til etisk videnskab og mener, at vores forskning bør adressere kritiske spørgsmål og samtidig sikre sikkerhed og etiske standarder.