Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (Low Rox) _ 11189es
Yakınlaştırmak için görüntüyü yuvarlayın Yakınlaştırmak için resme tıklayın
Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (Low Rox) _ 11189es
Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (Low Rox) _ 11189es
Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR Master Mix (Low Rox), yüksek floresan yoğunluğu, yüksek hassasiyet ve özgüllük ve yüksek amplifikasyon verimi sunan 2× gerçek zamanlı kantitatif PCR amplifikasyonu için bir ön çözeltidir. Çekirdek bileşen olan Hieff UNICON™ Taq DNA Polimerazı, numune hazırlama sırasında primer tavlamasından kaynaklanan spesifik olmayan amplifikasyonu etkili bir şekilde engelleyebilen antikor yöntemi ile sıcak başlatılır. Aynı zamanda formül, PCR reaksiyonunun amplifikasyon verimliliğini artıran faktörler ve farklı GC içeriklerine sahip genlerin (30~70%) amplifikasyonunu eşitleyen kolaylaştırıcılar ekler, böylece kantitatif PCR geniş bir kantitatif bölge aralığında iyi bir doğrusal ilişki elde edebilir....

Color-Traceable qPCR: Zero Mispipetting

Frequently Bought Together

Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (Low Rox) _ 11189es

Kaydetmek $15.00
YeasenSKU: 11189ES03
Boyut: 1 ml
Fiyat:
$40.00 $55.00
Stoklamak:
Stokta var

Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR Master Mix (Low Rox), yüksek floresan yoğunluğu, yüksek hassasiyet ve özgüllük ve yüksek amplifikasyon verimi sunan 2× gerçek zamanlı kantitatif PCR amplifikasyonu için bir ön çözeltidir. Çekirdek bileşen olan Hieff UNICON™ Taq DNA Polimerazı, numune hazırlama sırasında primer tavlamasından kaynaklanan spesifik olmayan amplifikasyonu etkili bir şekilde engelleyebilen antikor yöntemi ile sıcak başlatılır. Aynı zamanda formül, PCR reaksiyonunun amplifikasyon verimliliğini artıran faktörler ve farklı GC içeriklerine sahip genlerin (30~70%) amplifikasyonunu eşitleyen kolaylaştırıcılar ekler, böylece kantitatif PCR geniş bir kantitatif bölge aralığında iyi bir doğrusal ilişki elde edebilir. Ürün, pipetleme işlemini izlemek için farklı boyaların karışık renk değişim reaksiyonunu kullanır ve bu da pipetleme hatalarının oluşumunu etkili bir şekilde azaltır.

Özellikler

Pipetleme Takibi: Kaçırılan/Eklenen Hataların Riskini Azaltın

Mükemmel Amplifikasyon: Geniş bir doğrusal aralıkta iyi doğrusallık

Yüksek Hassasiyet: 2 kat konsantrasyon farkına sahip şablonları doğru bir şekilde ayırt edebilir

İyi Tekrarlanabilirlik: Tekrarlanan kuyularda küçük kuyular arası değişkenlik, daha iyi tekrarlanabilirlikle sonuçlanır

Kararlı ve Güvenilir: Reaksiyon sistemi oda sıcaklığında 24 saat saklanabilir ve ürün 20 dondurma-çözme döngüsünden sonra bile etkilenmez.

Uygulamalar

Gen İfadesi Fark Analizi

Mutlak Kantitatif Analiz

Özellikler

Konsantrasyon

2 ×(qPCR Karışımı)

Tespit yöntemi

Boya yöntemi

PCR yöntemi

qPCR

Polimeraz

Taq DNA Polimerazı

Örnek türü

DNA

Uygulama ekipmanları

Applied Biosystems 7500, 7500 Fast, ViiA7;Stratagene MX4000, MX3005P, MX3000P ve düşük konsantrasyonlarda ROX Referans Boyası eklenmesini gerektiren diğer floresan kantitatif PCR cihazları

Ürün Türü

Gerçek zamanlı floresan kantitatif PCR için ön karışım

(Başvuru) için başvur

Gen ifadesi

Bileşenler

Bileşenler No.

İsim

11189ES03

11189ES08

11189ES60

11189-A

Hieff UNICON™ Renkli GPS qPCR Ana Karışım (LOw (Rox)

1 ml

5×1 mL

100×1 mL

11189-B

10×Seyreltme Tamponu

1 ml

1 ml

20×1 mL

Nakliye ve Depolama

Bu ürün -25~-15℃'de 1 yıl süreyle saklanmalıdır.

Rakamlar

Şekil 1. Dinamik aralıkta güvenilir sonuçlar elde edilebilir.

10^1-10^7 gradyanlı 2 µL plazmit şablonu kullanılarak ilgili genler çoğaltıldı. Hieff UNICON™ ColorGPS ana karışımı, geniş bir doğrusal aralıkta iyi bir doğrusallık elde ederek, 7 büyüklük mertebesindeki bir şablon miktarı aralığını etkili bir şekilde tespit edebilir.

Figür2. 2 katlı şablon konsantrasyon farklılıklarını doğru bir şekilde ayırt edebilir.

Şablon olarak 2 katlı bir gradyanda seyreltilmiş 2 µL plazmid kullanılarak ilgili genler çoğaltıldı. Hieff UNICON™ ColorGPS ana karışımı şablon konsantrasyon farklılıklarını doğru bir şekilde çözebilir.

Figür3. Kuyular arası küçük değişkenlik gözlendi ve bu da daha iyi tekrarlanabilirliği gösterdi.

Şablon olarak düzinelerce plazmid kopyası kullanılarak, ilgili kullanım kılavuzlarında belirtilen prosedürlere göre farklı floresan kantitatif reaktiflerle amplifikasyon gerçekleştirildi. SD değerleri, diğer ters transkripsiyon reaktifleriyle karşılaştırıldığında, yeni ürünün tekrar kuyuları arasında daha küçük farklara ve daha iyi tekrarlanabilirliğe sahip olduğunu göstermektedir.

Figür4. Daha esnek, standart veya hızlı prosedürlere uygundur.

Standart prosedürde, denatürasyon süresi ve uzatma süresi sırasıyla 10 saniye ve 30 saniyeye ayarlanırken, hızlı prosedürde denatürasyon süresi ve uzatma süresi sırasıyla 3 saniye ve 10 saniyeye ayarlanarak 10 hedef gene karşılık gelen Ct değerleri tespit edilir. Sonuçlar, hem standart hem de hızlı prosedürlerde yeni ürünle elde edilen Ct değerlerinin güçlü bir korelasyona sahip olduğunu ve yeni ürünün hızlı prosedür kullanılarak iyi sonuçlar elde edebileceğini göstermektedir.

Figür5Reaksiyon sistemi hazırlandıktan sonra oda sıcaklığında 24 saat stabil kalabilmektedir.

Fare, insan 293 hücreleri ve Arabidopsis thaliana'dan farklı genler hedef olarak kullanılarak, reaksiyon sistemi hazırlandıktan sonra tespitten önce 24 saat boyunca farklı sıcaklıklarda karanlıkta bekletildi. Hemen işleme kıyasla, farklı genler için tespit farkı 0,5 Ct'yi geçmez, bu da uzun süreli işlemlerle de kararlı sonuçların elde edilebileceğini gösterir.

Belgeler:

Kılavuzlar

11189_Manuel_Sürüm EN20241218.pdf

Storage

This product should be stored at -25~-15℃ for 18 months.

FAQ

Please refer to the "YiSheng Biotechnology YiSheng Biotechnology Dye Method Fluorescence Quantitative PCR Mix Selection Table" for details. Click here to learn more and help you choose the appropriate reagents.
For molecular enzyme reagents, simply invert and mix them together, then perform a gentle centrifugation. It is not recommended to vigorously shake to mix them.
Refer to the manual. Ultimately, it is necessary to ensure that after being mixed with the template, the volume is exactly 1×. For example, for 20 μL of cDNA stock solution, add 180 μL of sterile ultrapure water to dilute it 10 times, resulting in 200 μL of diluted template. Take 90 μL of the diluted template and add 10 μL of 10× Dilution Buffer, mix well, and then use it. You can choose not to do this, but it will not affect the result.
You can choose to use the cDNA stock solution or dilute it. Just make sure that the Ct value of the gene you want falls within the range of 15 to 30. Generally, for every 10-fold dilution of cDNA, the Ct value increases by 3.3.
Store in a dark place and the reaction system must not be left open. These two points are essential. It can be placed in a 4℃ refrigerator or at room temperature for 24 hours. Before using, gently shake and centrifuge the sample before loading it onto the instrument. Before loading, carefully check if the tubes or plates have been contaminated.
https://cdn.shopify.com/s/files/1/0803/9419/1166/files/bbbb_1024x1024.png?v=1769394213 When designing primers, it is best to cross introns. The design method can refer to "Enjoyable! A single article to understand qPCR primer design, a must-have skill for experimental experts!" Also, validated primers can be selected. The selection method can refer to "Where to find ready-made qPCR primer sequences?"
The possible reasons are as follows:
1. The instrument has not been calibrated for a long time or it is aging. Usually, the instrument needs to be calibrated once a year. It is necessary to have an instrument engineer perform the calibration or replace the aging components.
2. A 10 μL reaction system was used. The normal system is a 20 μL system. Using half of the normal system would result in an excessively low total concentration of Rox, increasing the probability of BadRox occurrence. It is recommended to conduct the experiment using the 20 μL system.
The specificity of qPCR products can usually be determined through the melting curve. If it is still necessary to determine the products through gel electrophoresis, the qPCR product can undergo electrophoresis. Electrophoresis requires Loading Buffer, and the product cannot be directly loaded for electrophoresis.
1. Confirm whether the signal acquisition function is enabled in the program. If a two-step method is used, the signal acquisition should be set during the annealing extension stage.
2.Is the length of the product too long? If the length of the product is set to 500bp or more, this situation may occur. It is recommended that during primer design, the length of the product be controlled within the range of 80-300bp.
3. Are the primers inappropriate? If the primers are not designed correctly, they need to be redesigned. If the primers are correctly designed but seem to be degraded, PAGE electrophoresis can be used to check the integrity of the primers.
4. Template degradation: Prepare the template anew and repeat the experiment.
The analysis is conducted by observing the melting curve. The melting curve shows that the melting peak shape of NTC does not overlap with that of the corresponding gene, and the TM value of NTC is smaller than that of the corresponding gene. In this case, the product corresponding to NTC is a primer dimer. If the melting curve peak shape of the corresponding gene is a single peak, the collection of the signal of the related gene will not be affected. The melting curve shows that the melting peak shape of NTC overlaps with that of the corresponding gene. In this case, the product corresponding to NTC is likely to be the product of the corresponding gene. The system has been contaminated. We need to check one by one whether the water, primers, or reagents have been contaminated. If none of them have been contaminated, it might be aerosol contamination. Based on the obtained amplification data, the ΔCT value is calculated to determine whether the contamination has a significant impact on the system. If ΔCT ≥ 5, it indicates that the contamination has a minor effect and can be ignored.
It indicates the presence of genomic DNA contamination. It is recommended to use an RNA extraction kit that removes the genome for RNA extraction or during reverse transcription by adding a step to remove the genome. Alternatively, when designing the primers, a design across introns should be adopted.
1. If the CT value is less than 30, but the repeatability is very poor, what should we do? Improve the accuracy of sample addition. Avoid adding small volumes and reduce the error of addition. This can be achieved by preparing a large sample system, for example, mixing primers, water, and qPCR mix into a large system or using the method of mixing primers and water into a large system. The large system needs to be mixed evenly. Improve the accuracy of the pipette's aspiration. Pipettes usually need to be calibrated regularly, once a year.
2. What if CT is ≥ 30 but the repeatability is very poor? At this point, due to the low abundance of the effective template, the randomness of collisions between the template and the primers increases, thereby causing a greater difference between the replicons. It is recommended to try adding 2-3 replicons, and then eliminate the data with large differences for data analysis.
The overlapping peaks in the melting curve are located to the left of the main peak. This might be a situation caused by primer dimerization. One possible solution could be to increase the annealing temperature, reduce the primer concentration, or redesign the primers. The overlapping peaks in the melting curve are located to the right of the main peak. a. It is possible that the non-specific amplification occurred due to poor specificity of the primers. The primers need to be redesigned. b. It is possible that the template DNA was contaminated with genomic DNA. It is recommended to use an RNA extraction kit that removes the genomic DNA for RNA extraction, or to add a step of removing the genomic DNA during reverse transcription to reprepare the cDNA template.

Citations

Documents

Applications

Ayrıca sevebilirsiniz

Sorgu

SSS

Ürün yalnızca araştırma amaçlıdır ve insanlarda veya hayvanlarda terapötik veya teşhis amaçlı kullanım için tasarlanmamıştır. Ürünler ve içerikler, Yeasen Biotechnology'nin sahip olduğu patentler, ticari markalar ve telif haklarıyla korunmaktadır. Ticari marka sembolleri, tüm bölgelerde tescilli olmayıp, menşe ülkesini gösterir.

Bazı uygulamalar üçüncü tarafların ek fikri mülkiyet haklarına ihtiyaç duyabilir.

Yeasen, araştırmalarımızın güvenlik ve etik standartları sağlarken kritik soruları ele alması gerektiğine inanarak etik bilime kendini adamıştır.