Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (High ROX) _ 11190ES
Rulla över bilden för att zooma in Klicka på bilden för att zooma
Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (High ROX) _ 11190ES
Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (High ROX) _ 11190ES
Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR Master Mix (High Rox) är en förlösning för 2x realtids kvantitativ PCR-amplifiering, med hög fluorescensintensitet, hög känslighet och specificitet och högt amplifieringsutbyte. Kärnkomponenten, Hieff UNICON™ Taq DNA-polymeras, är varmstartad med antikroppsmetod, som effektivt kan hämma ospecifik amplifiering orsakad av primer-annealing under provberedningen. Samtidigt lägger formeln till faktorer för att förbättra amplifieringseffektiviteten för PCR-reaktionen och underlättar för att utjämna amplifieringen av gener med olika GC-innehåll (30~70%), så att den kvantitativa PCR kan erhålla ett bra linjärt förhållande i ett brett spektrum av kvantitativa regioner. Produkten använder den...

Color-Traceable qPCR: Zero Mispipetting

Frequently Bought Together

Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (High ROX) _ 11190ES

YeasenSku: 11190ES03
Storlek: 1 ml
Pris:
$55.00
Stock:
I lager

Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR Master Mix (High Rox) är en förlösning för 2x realtids kvantitativ PCR-amplifiering, med hög fluorescensintensitet, hög känslighet och specificitet och högt amplifieringsutbyte. Kärnkomponenten, Hieff UNICON™ Taq DNA-polymeras, är varmstartad med antikroppsmetod, som effektivt kan hämma ospecifik amplifiering orsakad av primer-annealing under provberedningen. Samtidigt lägger formeln till faktorer för att förbättra amplifieringseffektiviteten för PCR-reaktionen och underlättar för att utjämna amplifieringen av gener med olika GC-innehåll (30~70%), så att den kvantitativa PCR kan erhålla ett bra linjärt förhållande i ett brett spektrum av kvantitativa regioner. Produkten använder den blandade färgändringsreaktionen av olika färgämnen för att övervaka pipetteringsprocessen, vilket effektivt minskar förekomsten av pipeteringsfel.

Drag

Pipettspårning: Minska risken för missade/tilläggsfel

Utmärkt förstärkning: Bra linjäritet över ett brett linjärt område

Hög precision: Kan exakt särskilja mallar med en 2-faldig koncentrationsskillnad

Bra repeterbarhet: Liten variation mellan brunnar i replikatbrunnar, vilket resulterar i bättre repeterbarhet

Stabilt och pålitligt: ​​Reaktionssystemet kan förvaras i rumstemperatur i 24 timmar, och produkten förblir opåverkad efter 20 frys-upptiningscykler

Ansökningar

Analys av genuttrycksskillnad

Absolut kvantitativ analys

Specifikationer

Koncentration

2 ×(qPCR-mix)

Detektionsmetod

Färgningsmetod

PCR-metod

qPCR

Polymeras

Taq DNA-polymeras

Typ av prov

DNA

Appliceringsutrustning

Biosystems 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900HT, 7900HT Fast, StepOne, StepOnePlus och andra fluorescenskvantitativa PCR-instrument som kräver tillsats av höga koncentrationer av ROX Reference Dye

Produkttyp

Premix för kvantitativ PCR för fluorescens i realtid

Ansök till (ansökan)

Genuttryck

Komponenter

Komponentnr.

Namn

11190ES03

11190ES08

11190ES60

11190-A

Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR Master Mix (Hög Rox)

1 ml

5×1 ml

100×1 ml

11190-B

10×Utspädningsbuffert

1 ml

1 ml

20×1 ml

Frakt och förvaring

Denna produkt bör förvaras vid -25~-15 ℃ i 1 år.

Siffror

Figur 1. Pålitliga resultat kan erhållas inom det dynamiska området.

Med användning av 2 µL plasmidmallar med en gradient på 10^1-10^7 amplifierades de relaterade generna. Hieff UNICON™ ColorGPS master mix kan effektivt detektera ett mallmängdsintervall på 7 storleksordningar, vilket uppnår god linjäritet inom ett brett linjärt område.

Figur2. Kan exakt särskilja mallkoncentrationsskillnader på 2-faldigt.

Med användning av 2 µL plasmid utspädd i en 2-faldig gradient som mall amplifierades de relaterade generna. Hieff UNICON™ ColorGPS mastermix kan lösa mallkoncentrationsskillnader exakt.

Figur3. Liten variation mellan brunnar observeras, vilket visar bättre repeterbarhet.

Med hjälp av dussintals kopior av plasmiden som mall utfördes amplifiering med olika fluorescerande kvantitativa reagens enligt de procedurer som anges i deras respektive bruksanvisningar. SD-värdena indikerar att den nya produkten, jämfört med andra omvänd transkriptionsreagens, har mindre skillnader mellan replikatbrunnar och bättre repeterbarhet.

Figur4. Mer flexibel, lämplig för standard eller snabba procedurer.

I standardproceduren är denatureringstiden och förlängningstiden inställd på 10 sekunder respektive 30 sekunder, medan i snabbproceduren är denatureringstiden och förlängningstiden satt till 3 sekunder respektive 10 sekunder för att detektera Ct-värdena motsvarande 10 målgener.Resultaten visar att de Ct-värden som erhålls med den nya produkten i både standard- och snabbprocedurer har en stark korrelation, och den nya produkten kan uppnå goda resultat med snabbproceduren.

Figur5. Efter att reaktionssystemet har framställts kan det förbli stabilt vid rumstemperatur i 24 timmar.

Med hjälp av olika gener från mus, mänskliga 293-celler och Arabidopsis thaliana som mål, efter att ha förberett reaktionssystemet, placerades den i mörker vid olika temperaturer i 24 timmar före upptäckt. Jämfört med omedelbar bearbetning överstiger inte detektionsskillnaden för olika gener 0,5 Ct, vilket indikerar att stabila resultat även kan erhållas med långvariga operationer.

Dokument:

Manualer

11190_Manuell_Ver.EN20241218.pdf

Storage

This product should be stored at -25~-15℃ for 18 months.

FAQ

Please refer to the "Yeasen Biotechnology Dye Method Fluorescence Quantitative PCR Mix Selection Table" for details. Click here to learn more and help you choose the appropriate reagents.
For molecular enzyme reagents, simply invert and mix them together, then perform a gentle centrifugation. It is not recommended to vigorously shake to mix them.
Refer to the manual. Ultimately, it is necessary to ensure that after being mixed with the template, the volume is exactly 1×.
For example, for 20 μL of cDNA stock solution, add 180 μL of sterile ultrapure water to dilute it 10 times, resulting in 200 μL of diluted template. Take 90 μL of the diluted template and add 10 μL of 10× Dilution Buffer, mix well, and then use it. You can choose not to do this, but it will not affect the result.
You can choose to use the cDNA stock solution or dilute it. Just make sure that the Ct value of the gene you want falls within the range of 15 to 30. Generally, for every 10-fold dilution of cDNA, the Ct value increases by 3.3.
Store in a dark place and the reaction system must not be left open. These two points are essential. It can be placed in a 4℃ refrigerator or at room temperature for 24 hours. Before using, gently shake and centrifuge the sample before loading it onto the instrument. Before loading, carefully check if the tubes or plates have been contaminated.
The possible reasons are as follows:
1)The instrument has not been calibrated for a long time or it is aging. Usually, the instrument needs to be calibrated once a year. It is necessary to have an instrument engineer perform the calibration or replace the aging components.
2)A 10 μL reaction system was used. The normal system is a 20 μL system. Using half of the normal system would result in an excessively low total concentration of Rox, increasing the probability of BadRox occurrence. It is recommended to conduct the experiment using the 20 μL system.
The specificity of qPCR products can usually be determined through the melting curve. If it is still necessary to determine the products through gel electrophoresis, the qPCR product can undergo electrophoresis. Electrophoresis requires Loading Buffer, and the product cannot be directly loaded for electrophoresis.
1)Confirm whether the signal acquisition function is enabled in the program. If a two-step method is used, the signal acquisition should be set during the annealing extension stage.
2)Is the length of the product too long? If the length of the product is set to 500bp or more, this situation may occur. It is recommended that during primer design, the length of the product be controlled within the range of 80-300bp.
3)Are the primers inappropriate? If the primers are not designed correctly, they need to be redesigned. If the primers are correctly designed but seem to be degraded, PAGE electrophoresis can be used to check the integrity of the primers.
4)Template degradation: Prepare the template anew and repeat the experiment.
The analysis is conducted by observing the melting curve.
The melting curve shows that the melting peak shape of NTC does not overlap with that of the corresponding gene, and the TM value of NTC is smaller than that of the corresponding gene. In this case, the product corresponding to NTC is a primer dimer. If the melting curve peak shape of the corresponding gene is a single peak, the collection of the signal of the related gene will not be affected.
The melting curve shows that the melting peak shape of NTC overlaps with that of the corresponding gene. In this case, the product corresponding to NTC is likely to be the product of the corresponding gene. The system has been contaminated. We need to check one by one whether the water, primers, or reagents have been contaminated. If none of them have been contaminated, it might be aerosol contamination. Based on the obtained amplification data, the ΔCT value is calculated to determine whether the contamination has a significant impact on the system. If ΔCT ≥ 5, it indicates that the contamination has a minor effect and can be ignored.
It indicates the presence of genomic DNA contamination. It is recommended to use an RNA extraction kit that removes the genome for RNA extraction or during reverse transcription by adding a step to remove the genome. Alternatively, when designing the primers, a design across introns should be adopted.
Improve the accuracy of sample addition. Avoid adding small volumes and reduce the error of addition. This can be achieved by preparing a large sample system, for example, mixing primers, water, and qPCR mix into a large system or using the method of mixing primers and water into a large system. The large system needs to be mixed evenly.
Improve the accuracy of the pipette's aspiration. Pipettes usually need to be calibrated regularly, once a year.
At this point, due to the low abundance of the effective template, the randomness of collisions between the template and the primers increases, thereby causing a greater difference between the replicons. It is recommended to try adding 2-3 replicons, and then eliminate the data with large differences for data analysis.
The overlapping peaks in the melting curve are located to the left of the main peak. This might be a situation caused by primer dimerization. One possible solution could be to increase the annealing temperature, reduce the primer concentration, or redesign the primers.
The overlapping peaks in the melting curve are located to the right of the main peak.
1). It is possible that the non-specific amplification occurred due to poor specificity of the primers. The primers need to be redesigned.
2). It is possible that the template DNA was contaminated with genomic DNA. It is recommended to use an RNA extraction kit that removes the genomic DNA for RNA extraction, or to add a step of removing the genomic DNA during reverse transcription to reprepare the cDNA template.

Citations

Documents

Manual
11190ES-Hieff_UNICON_ColorGPS_qPCR_Master_Mix_High_Rox_-Ver.EN20241218.pdf
Brochure
qPCR_solutions.pdf

Applications

Du kanske också gillar

Förfrågan

Vanliga frågor

Produkten är endast avsedd för forskningsändamål och är inte avsedd för terapeutisk eller diagnostisk användning hos människor eller djur. Produkter och innehåll skyddas av patent, varumärken och upphovsrätt som ägs av Yeasen Biotechnology. Varumärkessymboler anger ursprungsland, inte nödvändigtvis registrering i alla regioner.

Vissa applikationer kan kräva ytterligare immateriella rättigheter från tredje part.

Yeasen är dedikerad till etisk vetenskap, och anser att vår forskning bör behandla kritiska frågor samtidigt som den säkerställer säkerhet och etiska standarder.