Hieff Unicon ™ Colorgps QPCR Master Mix (Low Rox) _ 11189es
Перевернуть изображение, чтобы увеличить Нажмите на изображение, чтобы увеличить
Hieff Unicon ™ Colorgps QPCR Master Mix (Low Rox) _ 11189es
Hieff Unicon ™ Colorgps QPCR Master Mix (Low Rox) _ 11189es
Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR Master Mix (Low Rox) — это предварительное решение для 2-кратной количественной ПЦР-амплификации в реальном времени, характеризующееся высокой интенсивностью флуоресценции, высокой чувствительностью и специфичностью, а также высоким выходом амплификации. Основной компонент, ДНК-полимераза Hieff UNICON™ Taq, запускается методом антител, что может эффективно ингибировать неспецифическую амплификацию, вызванную отжигом праймера во время подготовки образца. В то же время формула добавляет факторы для повышения эффективности амплификации реакции ПЦР и посредников для выравнивания амплификации генов с различным содержанием GC (30~70%), так что количественная ПЦР может получить хорошую линейную зависимость в широком диапазоне...

Color-Traceable qPCR: Zero Mispipetting

Frequently Bought Together

Hieff Unicon ™ Colorgps QPCR Master Mix (Low Rox) _ 11189es

Сохранять $15.00
YeasenSku: 11189ES03
Размер: 1 мл
Цена:
$40.00 $55.00
Запас:
В наличии

Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR Master Mix (Low Rox) — это предварительное решение для 2-кратной количественной ПЦР-амплификации в реальном времени, характеризующееся высокой интенсивностью флуоресценции, высокой чувствительностью и специфичностью, а также высоким выходом амплификации. Основной компонент, ДНК-полимераза Hieff UNICON™ Taq, запускается методом антител, что может эффективно ингибировать неспецифическую амплификацию, вызванную отжигом праймера во время подготовки образца. В то же время формула добавляет факторы для повышения эффективности амплификации реакции ПЦР и посредников для выравнивания амплификации генов с различным содержанием GC (30~70%), так что количественная ПЦР может получить хорошую линейную зависимость в широком диапазоне количественных областей. Продукт использует смешанную реакцию изменения цвета различных красителей для контроля операции пипетирования, что эффективно снижает возникновение ошибок пипетирования.

Функции

Отслеживание пипетирования: снижение риска пропущенных/дополнительных ошибок

Превосходное усиление: хорошая линейность в широком линейном диапазоне

Высокая точность: позволяет точно различать шаблоны с двукратной разницей в концентрации.

Хорошая повторяемость: небольшая межлуночная вариабельность в повторных лунках, что обеспечивает лучшую повторяемость.

Стабильность и надежность: реакционную систему можно хранить при комнатной температуре в течение 24 часов, а продукт остается неизменным после 20 циклов замораживания-оттаивания.

Приложения

Анализ разницы экспрессии генов

Абсолютный количественный анализ

Технические характеристики

Концентрация

2 ×(смесь для ПЦР)

Метод обнаружения

Метод окрашивания

Метод ПЦР

кПЦР

Полимераза

Taq ДНК-полимераза

Тип образца

ДНК

Оборудование для нанесения

Applied Biosystems 7500, 7500 Fast, ViiA7;Stratagene MX4000, MX3005P, MX3000P и другие приборы для количественной флуоресцентной ПЦР, требующие добавления низких концентраций контрольного красителя ROX

Тип продукта

Премикс для количественной флуоресцентной ПЦР в реальном времени

Подать заявку (заявка)

Экспрессия генов

Компоненты

Номер компонента

Имя

11189ES03

11189ES08

11189ES60

11189-А

Хайфф ЮНИКОН™ ColorGPS qPCR Мастер-микс (Лож Рокс)

1 мл

5×1 мл

100×1 мл

11189-Б

10×Буфер для разбавления

1 мл

1 мл

20×1 мл

Доставка и хранение

Данный продукт следует хранить при температуре от -25 до -15℃ в течение 1 года.

Цифры

Рисунок 1. Надежные результаты могут быть получены в динамическом диапазоне.

Используя 2 мкл плазмидных шаблонов с градиентом 10^1-10^7, были амплифицированы родственные гены. Hieff UNICON™ Мастер-микс ColorGPS может эффективно определять диапазон значений шаблона в 7 порядков, достигая хорошей линейности в широком линейном диапазоне.

Фигура2. Может точно различать различия в концентрации шаблона в 2 раза.

Используя 2 мкл плазмиды, разведенной в 2-кратном градиенте в качестве матрицы, были амплифицированы соответствующие гены. Hieff UNICON™ Мастер-микс ColorGPS может точно устранить различия в концентрации шаблонов.

Фигура3. Наблюдается небольшая межскважинная изменчивость, что свидетельствует о лучшей повторяемости.

Используя десятки копий плазмиды в качестве шаблона, амплификация была проведена с различными флуоресцентными количественными реагентами в соответствии с процедурами, указанными в соответствующих инструкциях. Значения SD указывают на то, что по сравнению с другими реагентами обратной транскрипции новый продукт имеет меньшие различия между лунками-репликами и лучшую повторяемость.

Фигура4. Более гибкий, подходит для стандартных или быстрых процедур.

В стандартной процедуре время денатурации и время удлинения устанавливаются на 10 секунд и 30 секунд соответственно, в то время как в быстрой процедуре время денатурации и время удлинения устанавливаются на 3 секунды и 10 секунд соответственно, чтобы обнаружить значения Ct, соответствующие 10 целевым генам. Результаты показывают, что значения Ct, полученные с новым продуктом как в стандартных, так и в быстрых процедурах, имеют сильную корреляцию, и новый продукт может достигать хороших результатов с использованием быстрой процедуры.

Фигура5После приготовления реакционной системы она может оставаться стабильной при комнатной температуре в течение 24 часов.

Используя различные гены из мыши, человеческих клеток 293 и Arabidopsis thaliana в качестве мишеней, после подготовки реакционной системы ее помещали в темноту при разных температурах на 24 часа перед обнаружением. По сравнению с немедленной обработкой, разница в обнаружении для разных генов не превышает 0,5 Ct, что указывает на возможность получения стабильных результатов при длительных операциях.

Документы:

Руководства

11189_Руководство_Вер.EN20241218.pdf

Storage

This product should be stored at -25~-15℃ for 18 months.

FAQ

Please refer to the "YiSheng Biotechnology YiSheng Biotechnology Dye Method Fluorescence Quantitative PCR Mix Selection Table" for details. Click here to learn more and help you choose the appropriate reagents.
For molecular enzyme reagents, simply invert and mix them together, then perform a gentle centrifugation. It is not recommended to vigorously shake to mix them.
Refer to the manual. Ultimately, it is necessary to ensure that after being mixed with the template, the volume is exactly 1×. For example, for 20 μL of cDNA stock solution, add 180 μL of sterile ultrapure water to dilute it 10 times, resulting in 200 μL of diluted template. Take 90 μL of the diluted template and add 10 μL of 10× Dilution Buffer, mix well, and then use it. You can choose not to do this, but it will not affect the result.
You can choose to use the cDNA stock solution or dilute it. Just make sure that the Ct value of the gene you want falls within the range of 15 to 30. Generally, for every 10-fold dilution of cDNA, the Ct value increases by 3.3.
Store in a dark place and the reaction system must not be left open. These two points are essential. It can be placed in a 4℃ refrigerator or at room temperature for 24 hours. Before using, gently shake and centrifuge the sample before loading it onto the instrument. Before loading, carefully check if the tubes or plates have been contaminated.
https://cdn.shopify.com/s/files/1/0803/9419/1166/files/bbbb_1024x1024.png?v=1769394213 When designing primers, it is best to cross introns. The design method can refer to "Enjoyable! A single article to understand qPCR primer design, a must-have skill for experimental experts!" Also, validated primers can be selected. The selection method can refer to "Where to find ready-made qPCR primer sequences?"
The possible reasons are as follows:
1. The instrument has not been calibrated for a long time or it is aging. Usually, the instrument needs to be calibrated once a year. It is necessary to have an instrument engineer perform the calibration or replace the aging components.
2. A 10 μL reaction system was used. The normal system is a 20 μL system. Using half of the normal system would result in an excessively low total concentration of Rox, increasing the probability of BadRox occurrence. It is recommended to conduct the experiment using the 20 μL system.
The specificity of qPCR products can usually be determined through the melting curve. If it is still necessary to determine the products through gel electrophoresis, the qPCR product can undergo electrophoresis. Electrophoresis requires Loading Buffer, and the product cannot be directly loaded for electrophoresis.
1. Confirm whether the signal acquisition function is enabled in the program. If a two-step method is used, the signal acquisition should be set during the annealing extension stage.
2.Is the length of the product too long? If the length of the product is set to 500bp or more, this situation may occur. It is recommended that during primer design, the length of the product be controlled within the range of 80-300bp.
3. Are the primers inappropriate? If the primers are not designed correctly, they need to be redesigned. If the primers are correctly designed but seem to be degraded, PAGE electrophoresis can be used to check the integrity of the primers.
4. Template degradation: Prepare the template anew and repeat the experiment.
The analysis is conducted by observing the melting curve. The melting curve shows that the melting peak shape of NTC does not overlap with that of the corresponding gene, and the TM value of NTC is smaller than that of the corresponding gene. In this case, the product corresponding to NTC is a primer dimer. If the melting curve peak shape of the corresponding gene is a single peak, the collection of the signal of the related gene will not be affected. The melting curve shows that the melting peak shape of NTC overlaps with that of the corresponding gene. In this case, the product corresponding to NTC is likely to be the product of the corresponding gene. The system has been contaminated. We need to check one by one whether the water, primers, or reagents have been contaminated. If none of them have been contaminated, it might be aerosol contamination. Based on the obtained amplification data, the ΔCT value is calculated to determine whether the contamination has a significant impact on the system. If ΔCT ≥ 5, it indicates that the contamination has a minor effect and can be ignored.
It indicates the presence of genomic DNA contamination. It is recommended to use an RNA extraction kit that removes the genome for RNA extraction or during reverse transcription by adding a step to remove the genome. Alternatively, when designing the primers, a design across introns should be adopted.
1. If the CT value is less than 30, but the repeatability is very poor, what should we do? Improve the accuracy of sample addition. Avoid adding small volumes and reduce the error of addition. This can be achieved by preparing a large sample system, for example, mixing primers, water, and qPCR mix into a large system or using the method of mixing primers and water into a large system. The large system needs to be mixed evenly. Improve the accuracy of the pipette's aspiration. Pipettes usually need to be calibrated regularly, once a year.
2. What if CT is ≥ 30 but the repeatability is very poor? At this point, due to the low abundance of the effective template, the randomness of collisions between the template and the primers increases, thereby causing a greater difference between the replicons. It is recommended to try adding 2-3 replicons, and then eliminate the data with large differences for data analysis.
The overlapping peaks in the melting curve are located to the left of the main peak. This might be a situation caused by primer dimerization. One possible solution could be to increase the annealing temperature, reduce the primer concentration, or redesign the primers. The overlapping peaks in the melting curve are located to the right of the main peak. a. It is possible that the non-specific amplification occurred due to poor specificity of the primers. The primers need to be redesigned. b. It is possible that the template DNA was contaminated with genomic DNA. It is recommended to use an RNA extraction kit that removes the genomic DNA for RNA extraction, or to add a step of removing the genomic DNA during reverse transcription to reprepare the cDNA template.

Citations

Documents

Applications

Вам также может понравиться

Расследование

Часто задаваемые вопросы

Продукт предназначен только для исследовательских целей и не предназначен для терапевтического или диагностического использования на людях или животных. Продукты и содержимое защищены патентами, товарными знаками и авторскими правами, принадлежащими Yeasen Biotechnology. Символы товарных знаков указывают на страну происхождения, а не обязательно на регистрацию во всех регионах.

Для некоторых приложений могут потребоваться дополнительные права интеллектуальной собственности третьих лиц.

Йесен привержен этической науке, полагая, что наши исследования должны затрагивать важнейшие вопросы, обеспечивая при этом безопасность и соблюдение этических стандартов.