Фермент вакцины мРНК (10 U/мкл) _ 10615ES

YeasenSku: 10615ES84

Размер: 2 Ку
Цена:
Цена продажи$365.00
Запас:
В наличии

мРНК эукариот образует особую структуру на 5'-конце после транскрипции, которая является структурой кэпа. Структура кэпа играет важную роль в стабильности, транспортировке и трансляции мРНК. Фермент кэпа вируса осповакцины является эффективным ферментом, который может катализировать образование структуры кэпа. Он состоит из двух субъединиц D1 и D12. Он также обладает активностью РНК-трифосфатазы, активностью гуанилат-ацилтрансферазы и активностью гуанин-метилтрансферазы, которые могут связывать структуру кэпа 7-метилгуанина (m7Gppp) с 5'-концом РНК (m7Gppp5'N). Фермент кэпа вируса осповакцины может кэпировать РНК в правильном направлении в течение одного часа, если присутствует подходящая концентрация буфера кэпа, гуанозинтрифосфата (GTP), S-аденозилметионина (SAM) и т. д.

Особенность

  • Выделено из рекомбинантного источника
  • Проверено на отсутствие эндонуклеаз, экзонуклеаз, РНКаз

Приложение

  • Кэпирование мРНК перед анализами трансляции/трансляцией in vitro
  • Маркировка 5'-конца мРНК

Спецификация

Источник Рекомбинантный кишечная палочка с геном фермента, покрывающего вирус коровьей оспы
Оптимальная температура 37℃
Буфер хранения 20 мМ Трис-HCl pH 8,0, 100 мМ NaCl, 1 мМ ДТТ, 0,1 мМ ЭДТА, 0,1% Тритон X-100, 50% глицерин
Определение единицы измерения 1 единица: количество фермента, необходимое для включения 10 пмоль ГТФ (α-32P) в транскрипт из 80 нуклеотидов (80 нт) при 37 ℃ в течение 1 часа.

Компоненты

Номер компонента Имя 10615ES84 (2000 U) 10615ES92 (10 000 ед.) 10615ES96 (100 000 ед.) 10615ES99 (5 МЕ)
10615 Фермент, блокирующий мРНК вируса коровьей оспы (10 ЕД/мкл) 200 мкл 1 мл 10 мл 500 мл


Доставка и хранение

Продукция класса GMP на основе фермента кэппинга мРНК вакцины поставляется с сухим льдом и может храниться при температуре от -15℃ до -25℃ в течение одного года.

Цифры

Рисунок 1. Эффективность колпачка почти достигла 100% с помощью системы колпачка вакцины от YEASEN. Масс-спектрометрия нуклеиновых кислот до реакции колпачка показана на рисунке 1A. Масс-спектрометрия нуклеиновых кислот после реакции колпачка показана на рисунке 1B.

Документы:


Storage

mRNA Vaccinia Capping Enzyme GMP-grade products are shipped with dry ice and can be stored at -15℃ ~ -25℃ for one year.

FAQ

The purpose of preheating is to unfold the secondary structure of RNA and bring it to a single-stranded state. If this step is not carried out, it will affect the efficiency of capping. This part is indeed a current technical challenge in production. Some companies now directly predict the secondary structure of RNA when determining the template sequence. The capping enzyme only recognizes the first few nucleotides of mRNA. If it is determined that this structure will not result in the secondary structure of RNA, then heating can be omitted.
In industry, the most commonly used method for enzymatic cap addition is to treat IVT products with vaccinia virus cap-adding enzyme, which can modify them into Cap 0 mRNA. The Cap 0 structure can be further modified into Cap 1 (m7GpppmN) under the action of 2'O-methyltransferase. With enzymatic cap addition, the cap addition efficiency can reach over 95%. The co-transcription cap addition method is simple to operate, but because GTP competes with the cap dimer, the cap addition rate of this method is a little lower; both methods have their own advantages and disadvantages.
By increasing the amount of VCE, for example, adding 10 ul of 100 U of enzyme activity to a 100 ul system, the main purpose is to enhance the methyltransferase activity of VCE. It can also be achieved by increasing SAM (0.5 mmol) to enhance the guanine transfer activity and increase the cap formation rate. For instance, our new single-strand cap enzyme has a significantly improved cap formation rate. This is because its guanine transfer activity is better than that of traditional VCE. For traditional VCE, the small subunit D12 is prone to precipitation and polymer formation, which makes purification difficult and leads to loss, thus resulting in higher costs and inability to control batches.
Currently, the industry has not specifically targeted this aspect. In the industry, the main focus is on the efficiency of the cap application. The current best cap application rate is above 80%. Of course, the higher the better. There is still no absolute standard for this. For the synthesized mRNA, purification methods can be employed, such as the one-step membrane encapsulation method by Kang*. This significantly reduces the purification process. The traditional method uses Oligo d(T) columns for purification, with good results achieving a recovery rate of 70-80%; poor results have a recovery rate of 40-50%. An additional step of a hydrophobic column can also be added after the Oligo d(T) column.
The co-transcription requirement stipulates that the starting position of the template must begin with AGG*. The two-step method does not have any specific requirements for the position. However, our current products have the highest yield for the AGGG starting position, mainly due to the preference of the T7 enzyme.

Citations

Applications

Вам также может понравиться

Расследование

Часто задаваемые вопросы

Продукт предназначен только для исследовательских целей и не предназначен для терапевтического или диагностического использования на людях или животных. Продукты и содержимое защищены патентами, товарными знаками и авторскими правами, принадлежащими Yeasen Biotechnology. Символы товарных знаков указывают на страну происхождения, а не обязательно на регистрацию во всех регионах.

Для некоторых приложений могут потребоваться дополнительные права интеллектуальной собственности третьих лиц.

Йесен привержен этической науке, полагая, что наши исследования должны затрагивать важнейшие вопросы, обеспечивая при этом безопасность и соблюдение этических стандартов.