Descrição do plano de fundo

A purificação de proteínas é o processo de isolar a proteína alvo das proteínas totais na amostra experimental, mantendo a atividade biológica e a integridade química da proteína alvo. Durante a construção de vetores, além de alguns elementos de expressão necessários, também é necessário considerar a otimização de códons e a escolha de marcadores. A escolha do marcador certo não é apenas benéfica para a purificação de proteínas e promoção da solubilidade de proteínas, mas também não deve afetar a estrutura e a função da proteína e aplicações posteriores. Esta seção se concentra na introdução de marcadores His e GST.

Tabela 1. Introdução à etiqueta His e GST

Marcação	Tamanho kDa	Sequência	Pureza	Solubilidade	Remoção de tags	Enzima de clivagem de tag
Dele	~0,84	HHHHHH	+	+	Não é necessário	Protease TEV
Imposto sobre bens e serviços	26	Composto por 211 aminoácidos	++	++	Obrigatório	3C Protease/PSP

Purificação de afinidade de proteína de tag His

A resina de agarose HisSep Ni-NTA é baseada em gel de agarose altamente reticulado como matriz, quimicamente acoplado com ácido nitrilotriacético tetra-coordenado (NTA) como ligante e após quelação de íons de níquel (Ni²⁺), forma uma estrutura octaédrica muito estável com íons de níquel no centro do octaedro. Essa estrutura pode proteger íons de níquel de ataques de moléculas pequenas. Comparado com a resina Ni-IDA, é mais estável e pode suportar certas concentrações de agentes redutores, agentes desnaturantes ou agentes de acoplamento sob condições adversas. Comparado com a resina Ni-TED, tem uma capacidade de adsorção maior para proteínas alvo. Tornou-se uma das resinas indispensáveis ​​para purificar proteínas marcadas com His em laboratórios.

Figura 1. Diagrama do princípio do produto da resina His.

Tabela 2. Yeasen Seu Guia de Seleção de Produtos de Purificação

Número do produto	20502ES	20503ES	20504ES/20505ES	20561ES
Nome do produto	Resina de agarose HisSep Ni-NTA	Resina HisSep Ni-NTA Agarose 6FF	Coluna de cromatografia HisSep Ni-NTA 6FF, 5 mL/1 mL	HisSep Ni-NTA MagBeads
Matriz	Gel de agarose reticulado a 6%	Gel de agarose 6% altamente reticulado	Gel de agarose 6% altamente reticulado	Microesferas de Agarose Magnética
Resistência à pressão	0,1 MPa, 1 bar	0,3 MPa, 3 bar	0.3 MPa, 3 bar	N / D
Capacidade	＞40 mg 6×proteína marcada com His/mL matriz	＞40 mg 6×proteína marcada com His/mL matriz		> 40 mg 6×proteína marcada com His/mL esferas magnéticas
Sugestão de Purificação	Matriz com resistência média à pressão, adequado para método de incubação, purificação em pequena escala por coluna de gravidade	Matriz com alta resistência à pressão, pode ser usada para purificação industrial de proteínas em larga escala com instrumento de purificação de proteínas		Purificação rápida e conveniente de proteínas por meio de separação magnética
Tolerância	8 M de ureia, 6 M de ácido clorídrico, 0,5-1 mM de DTT, 1 mM de EDTA, etc.
Aplicativo	A purificação de proteínas marcadas com His é a primeira escolha, alta carga, tolerância média, especialmente adequada para sistema de purificação de expressão procariótica

Apêndice: HisSep Ni-NTA MagBeads (Cat#20561ES) Características do produto

1. Em comparação com colunas e resinas pré-embaladas tradicionais, não há necessidade de centrifugação múltipla de amostras e controle da taxa de fluxo da amostra, reduzindo significativamente o tempo de purificação.
2. A purificação em uma etapa pode atingir uma pureza de mais de 95% da proteína alvo.
3. Alto rendimento de proteína alvo: o rendimento pode chegar a 70-80%.
4. Pode ser reutilizado até 5 vezes.
5. Fácil de ajustar a concentração e o volume da proteína alvo.
6. Pequena perda de proteína e nenhum risco de desnaturação ou precipitação de proteína.

Meio de purificação de afinidade de proteína de etiqueta GST

A cromatografia de afinidade de proteína de marcação GST utiliza a afinidade covalente entre a proteína de fusão GST e a glutationa fixa (GSH) por meio de ligações de enxofre e purifica com base no princípio da eluição de troca de GSH. Nessa purificação, uma glutationa é combinada com o braço do gel por meio de uma ligação de enxofre e, então, a força de ação específica entre a glutationa e a glutationa S-transferase (ou seja, marcação GST) é usada para fazer a proteína de fusão marcada com GST combinar-se com a glutationa do braço no gel, separando assim a proteína marcada de outras proteínas. A glutationa geralmente tem a forma oxidada GSSG e a forma reduzida GSH. Quando usamos a eluição de GSH, a GSH competirá com a glutationa do gel para se combinar com a proteína de fusão, eluindo assim a proteína alvo.

GSTSep Glutathione Agarose Resin é uma resina de purificação de proteína de tag GST, estruturalmente feita pela combinação química covalente de glutationa reduzida com gel de agarose a 6% como matriz através de um braço de 12 átomos. Este design melhorou muito a eficiência de purificação da resina, permitindo que ela carregue mais de 20 mg de proteína de fusão GST por mililitro de meio. O produto tem boa especificidade e desempenho de custo, e pode ser usado para purificar várias glutationa S-transferase, proteínas dependentes de glutationa e derivados recombinantes de glutationa em uma etapa.

Tabela 3. Yeasen Guia de seleção de produtos de purificação de GST

Número do produto	20507ES	20508ES	20509ES/20510ES	20562ES
Nome do produto	Resina de Glutationa Agarose GSTSep	Resina de Glutationa Agarose GSTSep 4FF	Coluna de cromatografia GSTSep Glutationa 4FF, 1 mL / 5 mL	GSTSep Glutationa Contas Magnéticas
Matriz	Gel de agarose reticulado a 6%	Gel de agarose 4% altamente reticulado	Gel de agarose 4% altamente reticulado	Microesferas de Agarose Magnética
Resistência à pressão	0,1 MPa, 1 bar	0,3 MPa, 3 bar	0,3 MPa, 3 bar	N / D
Capacidade	>20 mg de proteína GST (40 kDa)/mL de matriz	>10 mg de proteína GST (40 kDa)/mL de matriz		5-10 mg de proteína de fusão de tag GST/mL de esferas magnéticas
Aplicativo	Alta carga, Matrix com resistência média à pressão, adequado para método de incubação, purificação em pequena escala por coluna de gravidade, recomendado para clientes em escala laboratorial	Aplicação Baixa carga, alta resistência à pressão da matriz, pode ser usado para purificação de proteínas em larga escala industrial com instrumento de purificação de proteínas, mais fácil de aumentar a escala		Menor carga, purificação de proteínas rápida e conveniente por meio de separação magnética

Apêndice: Características do produto GSTSep Glutathione MagBeads (Cat#20562ES)

1. Purifique diretamente proteínas-alvo de alta pureza de amostras biológicas por meio de separação magnética em uma única etapa, simplificando muito o processo de purificação e melhorando a eficiência da purificação, adequado para purificação conveniente de proteínas de fusão GST em pesquisas científicas e campos industriais.
2. Usando esta esfera magnética para experimentos de pull-down de GST, como a separação magnética não requer centrifugações múltiplas e longos tempos de incubação, a operação é mais simples, rápida e automatizada em comparação aos métodos tradicionais de cromatografia.

Informações do produto

Posicionamento do produto	Nome do produto	Número do produto	Especificação
Purificação de proteínas de sua marca	HisSep Ni-NTA Agarose Resina	20502ES10/50/60	10 mL/50 mL/100 mL
	HisSep Ni-NTA Agarose Resina 6FF	20503ES10/50/60	10 mL/50 mL/100 mL
	Coluna de cromatografia HisSep Ni-NTA 6FF, 5 mL	20504ES08/25	5 mL/5x5 mL
	Coluna de cromatografia HisSep Ni-NTA 6FF, 1 mL	20505ES03/08	1 mL/5x1 mL
	HisSep Ni-NTA MagBeads	20561ES08/25	5 mL/25 mL
Purificação de proteínas com etiqueta GST	Resina de Glutationa Agarose GSTSep	20507ES10/50/60	10 mL/50 mL/100 mL
	Resina de Glutationa Agarose GSTSep 4FF	20508ES10/50/60	10 mL/50 mL/100 mL
	Coluna de cromatografia GSTSep Glutationa 4FF, 1 mL	20509ES03/08	1 mL/5x1 mL
	Coluna de cromatografia GSTSep Glutationa 4FF, 5 mL	20510ES08/25	5 mL/5x5 mL
	GSTSep Glutationa MagBeads	20561ES08/25	5 mL/25 mL