Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (Low Rox) _ 11189ES
Rol de afbeelding om in te zoomen Klik op de afbeelding om te zoomen
Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (Low Rox) _ 11189ES
Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (Low Rox) _ 11189ES
Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR Master Mix (Low Rox) is een pre-oplossing voor 2× real-time kwantitatieve PCR-amplificatie, met een hoge fluorescentie-intensiteit, hoge gevoeligheid en specificiteit en een hoge amplificatieopbrengst. De kerncomponent, Hieff UNICON™ Taq DNA Polymerase, wordt warm gestart door de antilichaammethode, die niet-specifieke amplificatie veroorzaakt door primer-annealing tijdens monsterbereiding effectief kan remmen. Tegelijkertijd voegt de formule factoren toe om de amplificatie-efficiëntie van de PCR-reactie te verbeteren en facilitators om de amplificatie van genen met verschillende GC-inhoud (30~70%) gelijk te maken, zodat de kwantitatieve PCR een goede lineaire relatie kan verkrijgen...

Color-Traceable qPCR: Zero Mispipetting

Frequently Bought Together

Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (Low Rox) _ 11189ES

Redden $15.00
YeasenSKU: 11189ES03
Maat: 1 ml
Prijs:
$40.00 $55.00
Voorraad:
Op voorraad

Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR Master Mix (Low Rox) is een pre-oplossing voor 2× real-time kwantitatieve PCR-amplificatie, met een hoge fluorescentie-intensiteit, hoge gevoeligheid en specificiteit en een hoge amplificatieopbrengst. De kerncomponent, Hieff UNICON™ Taq DNA Polymerase, wordt warm gestart door de antilichaammethode, die niet-specifieke amplificatie veroorzaakt door primer-annealing tijdens monsterbereiding effectief kan remmen. Tegelijkertijd voegt de formule factoren toe om de amplificatie-efficiëntie van de PCR-reactie te verbeteren en facilitators om de amplificatie van genen met verschillende GC-inhoud (30~70%) gelijk te maken, zodat de kwantitatieve PCR een goede lineaire relatie kan verkrijgen in een breed scala aan kwantitatieve regio's. Het product maakt gebruik van de gemengde kleurveranderingsreactie van verschillende kleurstoffen om de pipetteerbewerking te bewaken, wat het optreden van pipetteerfouten effectief vermindert.

Functies

Pipetteren volgen: verminder het risico op gemiste fouten/toevoegfouten

Uitstekende versterking: goede lineariteit over een breed lineair bereik

Hoge precisie: kan nauwkeurig sjablonen onderscheiden met een concentratieverschil van 2 keer

Goede herhaalbaarheid: Kleine inter-well variabiliteit in replicatiewells, wat resulteert in een betere herhaalbaarheid

Stabiel en betrouwbaar: het reactiesysteem kan 24 uur bij kamertemperatuur worden bewaard en het product blijft onaangetast na 20 vries-dooicycli

Toepassingen

Analyse van verschillen in genexpressie

Absolute kwantitatieve analyse

Specificaties

Concentratie

2 ×(qPCR-mix)

Detectiemethode

Verfmethode

PCR-methode

qPCR

Polymerase

Taq DNA-polymerase

Type monster

DNA

Toepassingsapparatuur

Applied Biosystems 7500, 7500 Fast, ViiA7;Stratagene MX4000, MX3005P, MX3000P en andere fluorescentie kwantitatieve PCR-instrumenten die de toevoeging van lage concentraties ROX-referentiekleurstof vereisen

Producttype

Premix voor real-time fluorescentie kwantitatieve PCR

Solliciteren naar (applicatie)

Genexpressie

Componenten

Componenten nr.

Naam

11189ES03

11189ES08

11189ES60

11189-A

Hoge UNICON™ KleurGPS qPCR Meestermix (IkOw (Rox)

1 ml

5×1 ml

100×1 ml

11189-B

10× Verdunningsbuffer

1 ml

1 ml

20×1 ml

Verzending en opslag

Dit product moet gedurende 1 jaar bij -25~-15℃ bewaard worden.

Cijfers

Figuur 1. Binnen het dynamische bereik kunnen betrouwbare resultaten worden verkregen.

Met behulp van 2 µL plasmide-templates met een gradiënt van 10^1-10^7 werden de gerelateerde genen versterkt. Hieff UNICON™ ColorGPS Master Mix kan effectief een sjabloonhoeveelheidsbereik van 7 ordegroottes detecteren en bereikt daarmee een goede lineariteit binnen een breed lineair bereik.

Figuur2Kan nauwkeurig verschillen in sjabloonconcentratie van 2-voudig onderscheiden.

Met behulp van 2 µL plasmide verdund in een 2-voudige gradiënt als template, werden de gerelateerde genen versterkt. Hieff UNICON™ ColorGPS Master Mix kan nauwkeurig de verschillen in sjabloonconcentratie oplossen.

Figuur3Er wordt een kleine variatie tussen putjes waargenomen, wat duidt op een betere herhaalbaarheid.

Met behulp van tientallen kopieën van plasmide als template werd amplificatie uitgevoerd met verschillende fluorescerende kwantitatieve reagentia volgens de procedures die in hun respectievelijke instructiehandleidingen zijn gespecificeerd. De SD-waarden geven aan dat het nieuwe product, vergeleken met andere reverse transcriptiereagentia, kleinere verschillen heeft tussen replicatenputjes en een betere herhaalbaarheid.

Figuur4. Flexibeler, geschikt voor standaard- of snelle procedures.

In de standaardprocedure worden de denaturatietijd en de extensietijd respectievelijk ingesteld op 10 seconden en 30 seconden, terwijl in de snelle procedure de denaturatietijd en de extensietijd respectievelijk worden ingesteld op 3 seconden en 10 seconden om de Ct-waarden te detecteren die overeenkomen met 10 doelgenen. De resultaten tonen aan dat de Ct-waarden die met het nieuwe product zijn verkregen in zowel de standaard- als de snelle procedures een sterke correlatie hebben en dat het nieuwe product goede resultaten kan behalen met behulp van de snelle procedure.

Figuur5Nadat het reactiesysteem is bereid, kan het 24 uur lang stabiel blijven bij kamertemperatuur.

Met behulp van verschillende genen van muis, menselijke 293-cellen en Arabidopsis thaliana als doelen, werd het reactiesysteem na het voorbereiden in het donker geplaatst bij verschillende temperaturen gedurende 24 uur voor detectie. Vergeleken met directe verwerking, is het detectieverschil voor verschillende genen niet groter dan 0,5 Ct, wat aangeeft dat stabiele resultaten ook kunnen worden verkregen met langdurige bewerkingen.

Documenten:

Handleidingen

11189_Handmatig_Versie EN20241218.pdf

Storage

This product should be stored at -25~-15℃ for 18 months.

FAQ

Please refer to the "YiSheng Biotechnology YiSheng Biotechnology Dye Method Fluorescence Quantitative PCR Mix Selection Table" for details. Click here to learn more and help you choose the appropriate reagents.
For molecular enzyme reagents, simply invert and mix them together, then perform a gentle centrifugation. It is not recommended to vigorously shake to mix them.
Refer to the manual. Ultimately, it is necessary to ensure that after being mixed with the template, the volume is exactly 1×. For example, for 20 μL of cDNA stock solution, add 180 μL of sterile ultrapure water to dilute it 10 times, resulting in 200 μL of diluted template. Take 90 μL of the diluted template and add 10 μL of 10× Dilution Buffer, mix well, and then use it. You can choose not to do this, but it will not affect the result.
You can choose to use the cDNA stock solution or dilute it. Just make sure that the Ct value of the gene you want falls within the range of 15 to 30. Generally, for every 10-fold dilution of cDNA, the Ct value increases by 3.3.
Store in a dark place and the reaction system must not be left open. These two points are essential. It can be placed in a 4℃ refrigerator or at room temperature for 24 hours. Before using, gently shake and centrifuge the sample before loading it onto the instrument. Before loading, carefully check if the tubes or plates have been contaminated.
https://cdn.shopify.com/s/files/1/0803/9419/1166/files/bbbb_1024x1024.png?v=1769394213 When designing primers, it is best to cross introns. The design method can refer to "Enjoyable! A single article to understand qPCR primer design, a must-have skill for experimental experts!" Also, validated primers can be selected. The selection method can refer to "Where to find ready-made qPCR primer sequences?"
The possible reasons are as follows:
1. The instrument has not been calibrated for a long time or it is aging. Usually, the instrument needs to be calibrated once a year. It is necessary to have an instrument engineer perform the calibration or replace the aging components.
2. A 10 μL reaction system was used. The normal system is a 20 μL system. Using half of the normal system would result in an excessively low total concentration of Rox, increasing the probability of BadRox occurrence. It is recommended to conduct the experiment using the 20 μL system.
The specificity of qPCR products can usually be determined through the melting curve. If it is still necessary to determine the products through gel electrophoresis, the qPCR product can undergo electrophoresis. Electrophoresis requires Loading Buffer, and the product cannot be directly loaded for electrophoresis.
1. Confirm whether the signal acquisition function is enabled in the program. If a two-step method is used, the signal acquisition should be set during the annealing extension stage.
2.Is the length of the product too long? If the length of the product is set to 500bp or more, this situation may occur. It is recommended that during primer design, the length of the product be controlled within the range of 80-300bp.
3. Are the primers inappropriate? If the primers are not designed correctly, they need to be redesigned. If the primers are correctly designed but seem to be degraded, PAGE electrophoresis can be used to check the integrity of the primers.
4. Template degradation: Prepare the template anew and repeat the experiment.
The analysis is conducted by observing the melting curve. The melting curve shows that the melting peak shape of NTC does not overlap with that of the corresponding gene, and the TM value of NTC is smaller than that of the corresponding gene. In this case, the product corresponding to NTC is a primer dimer. If the melting curve peak shape of the corresponding gene is a single peak, the collection of the signal of the related gene will not be affected. The melting curve shows that the melting peak shape of NTC overlaps with that of the corresponding gene. In this case, the product corresponding to NTC is likely to be the product of the corresponding gene. The system has been contaminated. We need to check one by one whether the water, primers, or reagents have been contaminated. If none of them have been contaminated, it might be aerosol contamination. Based on the obtained amplification data, the ΔCT value is calculated to determine whether the contamination has a significant impact on the system. If ΔCT ≥ 5, it indicates that the contamination has a minor effect and can be ignored.
It indicates the presence of genomic DNA contamination. It is recommended to use an RNA extraction kit that removes the genome for RNA extraction or during reverse transcription by adding a step to remove the genome. Alternatively, when designing the primers, a design across introns should be adopted.
1. If the CT value is less than 30, but the repeatability is very poor, what should we do? Improve the accuracy of sample addition. Avoid adding small volumes and reduce the error of addition. This can be achieved by preparing a large sample system, for example, mixing primers, water, and qPCR mix into a large system or using the method of mixing primers and water into a large system. The large system needs to be mixed evenly. Improve the accuracy of the pipette's aspiration. Pipettes usually need to be calibrated regularly, once a year.
2. What if CT is ≥ 30 but the repeatability is very poor? At this point, due to the low abundance of the effective template, the randomness of collisions between the template and the primers increases, thereby causing a greater difference between the replicons. It is recommended to try adding 2-3 replicons, and then eliminate the data with large differences for data analysis.
The overlapping peaks in the melting curve are located to the left of the main peak. This might be a situation caused by primer dimerization. One possible solution could be to increase the annealing temperature, reduce the primer concentration, or redesign the primers. The overlapping peaks in the melting curve are located to the right of the main peak. a. It is possible that the non-specific amplification occurred due to poor specificity of the primers. The primers need to be redesigned. b. It is possible that the template DNA was contaminated with genomic DNA. It is recommended to use an RNA extraction kit that removes the genomic DNA for RNA extraction, or to add a step of removing the genomic DNA during reverse transcription to reprepare the cDNA template.

Citations

Documents

Applications

Misschien vind je het ook leuk

Navraag

FAQ

Het product is alleen bedoeld voor onderzoeksdoeleinden en is niet bedoeld voor therapeutisch of diagnostisch gebruik bij mensen of dieren. Producten en inhoud worden beschermd door patenten, handelsmerken en auteursrechten die eigendom zijn van Yeasen Biotechnologie. Handelsmerksymbolen geven het land van herkomst aan, niet noodzakelijkerwijs registratie in alle regio's.

Voor bepaalde toepassingen zijn mogelijk aanvullende intellectuele eigendomsrechten van derden vereist.

Yeasen is toegewijd aan ethische wetenschap en is van mening dat ons onderzoek kritische vragen moet beantwoorden en tegelijkertijd de veiligheid en ethische normen moet waarborgen.