설명
단백질 A 정제 배지는 대부분의 항체에 특이적으로 흡착되기 때문에 항체 의약품 생산 공정에서 널리 사용됩니다. 단백질 A는 공유 결합을 통해 정제 배지에 결합하지만, 정제 과정 중 단백질 A가 쉐딩(Shedding)될 가능성이 있어 잔류합니다. 단백질 A ELISA 키트는 시료 내 잔류 단백질 A를 정확하게 정량할 수 있는 ELISA 키트로, 항체 정제 공정 최적화, 주요 품질 매개변수 평가, 중간체 및 최종 제품 내 단백질 A 잔류물 검출에 사용할 수 있습니다.
이 키트는 이중 항체 샌드위치 효소면역측정법(ELISA)의 실험 원리를 적용하여 단백질 A의 잔류물을 검출합니다. 단백질 A 표준(36716-B)과 검사할 샘플을 항-단백질 A 항체로 미리 코팅한 단백질 A 캡처 마이크로웰 스트립(36716-A)에 첨가한 다음, 희석된 비오틴 표지 단백질 A 검출 항체(36716-C)와 마지막으로 스트렙타비딘-HRP(SA-HRP)(36716-D)를 첨가하여 항체 + 항원 + 항체-비오틴 + SA-HRP 복합체를 형성합니다. 플레이트를 세척한 후, TMB 발색 용액(36716-F)을 첨가하여 발색합니다. TMB는 HRP 효소의 촉매 작용으로 무색에서 파란색으로, 마지막으로 정지 용액(36716-G)의 작용으로 노란색으로 전환되었습니다. 노란색의 농도는 샘플에서 검출된 단백질 A의 양과 양의 상관관계를 나타냅니다.
본 키트의 검출 범위 는 15.625~1000 입니다. p g/mL ; 최저 검출 한계는 5.6 p g/mL입니다.
특징
- 매우 민감함: 최소 5.6% 까지 감지 진행 중 및 최종 생물학적 샘플의 단백질 A 잔류물 p g/mL .
- 정확성 보장: 단백질 A 잔류물은 75 %-1.25 % 의 회수율로 정확하게 검출될 수 있습니다 .
- 특이성: 다른 외인성 단백질의 간섭 없이 단백질 A 를 특이적으로 감지합니다 .
- 안정성: 로트 간 차이가 적고, 키트 속성은 7 일 동안 37℃에서 영향을 받지 않습니다.
- 간편한 신호 수집: 바이오틴-스트렙타비딘 시스템을 사용하면 신호를 안정적으로 확대할 수 있습니다.
애플리케이션
생물학적 제품의 잔류 단백질 A 테스트
사양
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감광도 |
5.6ng/mL(범위 15.625~1000pg/mL) |
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분석 시간 |
<4시간 |
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분석 원리 |
2부위 면역효소 검사 |
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신호 증폭 |
비오틴-스트렙타비딘 시스템 |
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검출 파장 |
450nm-630nm |
제품 성능
|
제품 성능 검증 프로그램 |
참조 표준 또는 요구 사항 |
예센 |
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1. 키트에 대한 표준 |
수제 표준이 제공됩니다. |
단백질 A 동결건조 분말 |
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2. 선형 범위 |
분석 범위 |
실제 상황을 참조하세요 |
15.625~1000 pg/mL |
|
알 2 |
≥0.98 |
≥0.99 이상 |
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|
각 농도별 검출값 CV |
CV≤15% |
CV≤5% |
|
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3. 정확성 |
회수율 |
50%~150% |
70%~130% 이상 |
|
4. 정밀도 |
반복성 |
CV≤15% |
< 10% |
|
중간 정밀도 |
CV≤15% |
< 15% |
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5. 독점성 |
다양한 브랜드의 단백질 A를 감지할 수 있습니다. |
일부 주요 브랜드의 Protein A ELISA 키트에서 Protein A 표준을 정확하게 감지할 수 있습니다. |
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6. 민감도 |
정량화 한계 |
목표 물질의 가장 작은 농도의 신뢰할 수 있는 정량화 |
7.8125 pg/mL |
|
검출 한계 |
실제 상황을 참조하세요 |
5.6 pg/mL |
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7. 내구성 |
시약 안정성 |
다양한 보관 온도가 시약 성능에 미치는 영향 평가 |
7일 동안 4°C, 7일 동안 37°C로 유지되었으며, T0와의 차이는 70-130% 범위입니다. |
|
기기 호환성 |
키트는 테스트 결과에 영향을 미치지 않고 다양한 장치에 사용됩니다. |
다양한 유형의 마이크로플레이트 리더(예: 분자 장치 마이크로플레이트 리더)와 호환 가능 |
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구성 요소
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구성품 번호 |
이름 |
36716ES48 |
36716ES96 |
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36716-A |
항단백질 A 코팅 마이크로타이터 스트립 |
48톤 |
96티 |
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36716-B |
단백질 A 표준 ( 1μg/mL ) |
5 0 μL |
100 μL |
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36716-C |
검출 항체 : 바이오틴 결합 항체 ( 120× ) |
5 0 μL |
100 μL |
|
36716-D |
스트렙타비딘-HRP ( 500× ) |
30 μL |
60 μL |
|
36716-E |
희석 완충액 ( 5× ) |
2 5mL |
50ml |
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36716-F |
세척 완충액 농축액 ( 20× ) |
2 5mL |
50ml |
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36716-G |
TMB 기판 |
6mL |
1 2 mL |
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36716-H |
해결책 중단 |
5mL |
10mL |
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36716-I |
플레이트 실러 |
각각 3 개씩 |
각각 5개씩 |
저장
본 제품은 2°C ~8°C에 보관하십시오. 미개봉 제품은 1년간 유효합니다.
* 키트를 수령하시면 모든 구성품이 완벽한지 확인하시고, 즉시 해당 상태로 보관해 주시기 바랍니다.
수치
특이성 시연
E 브랜드 Protein A ELISA 키트와 Yeasen's Protein A ELISA 키트는 4가지 유형의 Protein A를 검출하는 데 사용되었으며, 그 중 3가지는 키트의 표준이고 다른 하나는 시중의 주요 Protein A 리간드입니다.Yeasen 제품은 주요 Protein A ELISA 키트에서 Protein A 표준을 정확하게 검출할 수 있으며 항체 생산에서 주요 Protein A 패키지의 Protein A 리간드에 대해 E 브랜드보다 동등하거나 더 나은 검출 능력을 가지고 있습니다.Yeasen 제품은 시중의 일부 주요 Protein A ELISA 키트에서 Protein A 표준을 정확하게 검출할 수 있으며, Brand E와 비교했을 때 Yeasen 제품은 항체 생산에 사용되는 주요 Protein A 필러의 Protein A 리간드에 대해 동등하거나 더 나은 검출 능력을 가지고 있습니다.
표 1. Yeasen Protein A ELISA 키트의 특이성은 위 표에 표시되어 있습니다.
|
단백질 A |
상표 |
|
|
예센 |
E 브랜드 |
|
|
예센 |
100.00% |
121.50% |
|
제이 브랜드 |
97.20% |
99.30% |
|
E 브랜드 |
80.63% |
100.00% |
|
재조합 단백질 A-1 |
95.50% |
65.70% |
정밀 디스플레이
에이) 반복성
|
스파이크 샘플 |
분석 내 |
||
|
중복 |
평균 농도(ng/mL) |
이력서 (%) |
|
|
S- 250 ng/mL |
10 |
271.23 |
3.8% |
|
S- 62.5 ng/mL |
10 |
60.38 |
6.0% |
|
S- 15.625 ng/mL |
10 |
17.21 |
4.5% |
비) 중간 정밀도
표 2. 단백질 A ELISA의 정확도는 위의 계획에 따라 분석되었습니다.
|
스파이크 샘플 |
Inter-Assay |
||
|
중복 |
평균 농도(ng/mL) |
이력서 (%) |
|
|
S- 250 ng/mL |
30 |
270.32 |
4.3% |
|
S- 62.5 ng/mL |
30 |
63.2 |
6.1% |
|
S- 15.625 ng/mL |
30 |
17.94 |
10.2% |
10개의 중복된 시료를 표준곡선에서 3가지 농도 로 시험한 결과 , 모든 CV%가 10 % 미만이었다( 표 1 A). 3 개의 단백질 A ELISA 키트를 테스트했고 CV%는 1 5 % 미만이었습니다( 표 1B ).
정확도 검증
34 μg/mL hIgG 정품 샘플에 다양한 농도의 단백질 A를 첨가하였고, 단백질 A는 스파이크되지 않은 샘플에서도 동시에 검출되었습니다. 스파이크된 샘플의 회수율은 hIgG를 함유한 샘플에서 다양한 농도의 단백질 A에 대해 90%~110% 범위였습니다.
표 3. 정확도 검증
|
추가된 표준의 집중 ( pg/mL ) |
34 μg/mL hIgG 스파이크 표준 |
|
|
측정값 ( pg/mL ) |
회수율 |
|
|
S-500 pg/mL |
539.099 |
101.1% |
|
S-250 pg/mL |
280.190 |
98.6% |
|
S-125 pg/mL |
156.64 9 |
98.4% |
|
S-62.5 pg/mL |
97.074 |
101.4% |
|
S-31.25 pg/mL |
64.63 7 |
99.1% |
|
S-15.625 pg/mL |
49.550 |
101.6% |
|
S-7.8125 pg/mL |
42.206 |
109.1% |
|
스파이크되지 않은 샘플 |
33.68 3 |
/ |
서류:
안전 데이터 시트
매뉴얼
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