설명
쥐 RNase 억제제는 인간 태반에서 발견되는 리보뉴클레아제(RNase)의 특정 억제제로, 비공유 결합으로 RNase와 결합하여 RNase를 불활성화하는 복합체를 형성함으로써 RNase를 특이적으로 불활성화합니다.
이 키트는 이중 항체 샌드위치 효소면역측정법(샌드위치 ELISA) 원리를 이용하여 샘플 내 잔류 쥐 RNase 억제제를 검출합니다 . 먼저, 쥐 RNase 억제제 표준물질과 검사 샘플을 항쥐 RNase 억제제로 코팅된 마이크로타이터 스트립(36707-A)에 첨가합니다 . 그런 다음 , 희석된 비오틴 표지 항쥐 RNase 억제제 항체 ( 36707-C) 를 첨가 하고 , 마지막으로 스트렙타비딘-H RP(36707-D)를 첨가하여 항체 + 항원 + 항체-비오틴 + SA-HRP 복합체를 형성합니다. 이어서 TMB 기질 ( 36707-H) 을 첨가합니다 . 복합체 세척 후 발색 반응을 관찰하기 위해 복합체에 투입하였다 . TMB는 HRP 효소의 촉매 작용으로 파란색으로 변하고, 산의 존재 하에서는 노란색으로 변하며, 색의 농도는 시료 내 Murine RNase Inhibitor의 양과 양의 상관관계를 보였다.
이 키트의 검출 범위는 2~128 ng/mL이고, 하한 검출 한계는 1.5 ng/mL입니다.
특징
- 높은 민감도: 진행 중 및 최종 생물학적 샘플에서 최소 1.5 ng/mL의 쥐 RNase 억제제 잔류물을 감지합니다.
- 정확성 보장: 쥐 RNase 억제제 잔류물은 75 %-1.25 % 의 회수율로 정확하게 검출될 수 있습니다 .
- 특이성: YEASEN Murine RNase Inhibitor 와 함께 사용하면 잔류물을 정확하게 검출할 수 있습니다.
- 안정성: 로트 간 차이가 적고, 키트 속성은 7 일 동안 37℃에서 영향을 받지 않습니다.
- 간편한 신호 수집: 바이오틴-스트렙타비딘 시스템을 사용하면 신호를 안정적으로 확대할 수 있습니다.
애플리케이션
- 생물학적 제품의 잔류 쥐 RNase 억제제 테스트
- mRNA 백신 및 치료제 생산에서의 잔류 단백질 검출
- 핵산 합성 및 시험관 내 전사(IVT)에서의 정제 검증
사양
감광도 |
1.5 ng/mL (범위 2~128 ng/mL) |
분석 시간 |
<4시간 |
분석 원리 |
2부위 면역효소 검사 |
신호 증폭 |
비오틴-스트렙타비딘 시스템 |
검출 파장 |
450nm-630nm |
구성 요소
구성품 번호 |
이름 |
36707ES48 |
36707ES96 |
36707-A |
항-쥐 RNase 억제제 코팅 마이크로타이터 스트립 |
48톤 |
96티 |
36707-B * |
표준: 쥐 RNase 억제제 |
1 바이알 |
2 바이알 |
36707-C |
검출 항체 : 비오틴 결합 항체 |
60 μL |
120 μL |
36707-D |
스트렙타비딘-HRP |
20 μL |
40 μL |
36707-E |
희석 완충액 1 |
25mL |
45mL |
36707-F |
세척 완충액 농축액(20×) |
25mL |
50ml |
36707-G |
희석 완충액 2 |
15mL |
30mL |
36707-H |
TMB 기판 |
8mL |
15mL |
36707-I |
해결책 중단 |
5mL |
10mL |
36707-J |
플레이트 실러 |
각각 3개씩 |
각각 5개씩 |
* 표준(36707-B)은 동결건조 분말입니다.
저장
본 제품은 2°C ~8°C에 보관하십시오. 미개봉 제품은 1년간 유효합니다.
* 키트를 수령하시면 모든 구성품이 완벽한지 확인하시고, 즉시 해당 상태로 보관해 주시기 바랍니다.
수치
- 정도
에이) 반복성
스파이크 샘플 |
분석 내 |
||
중복 |
평균 농도(ng/mL) |
이력서(%) |
|
S-64ng/mL |
10 |
62.538 |
2.2% |
S-32 ng/mL |
10 |
33.477 |
6.2% |
S-4 ng/mL |
10 |
3.851 |
8.2% |
비) 중간 정밀도
스파이크 샘플 |
Inter-Assay |
||
중복 |
평균 농도(ng/mL) |
이력서(%) |
|
S-64 ng/mL |
30 |
63.800 |
3.9% |
S-32 ng/mL |
30 |
33.533 |
6.7% |
S-4 ng/mL |
30 |
4.028 |
13.2% |
테이블 1. Murine RNase Inhibitor ELISA 의 정확도는 위와 같이 평가하였다. 계획
10개의 중복된 시료를 표준곡선에서 3가지 농도 로 시험한 결과 , 모든 CV%가 10 % 미만이었다( 표 1 A). 3 개의 Salt Active UltraNuclease ELISA 키트를 테스트했으며 CV%는 1 5 % 미만이었습니다 ( 표 1B ).
- 정확성
mRNA 정제 샘플에 높은 농도, 중간 농도, 낮은 농도 의 세 가지 농도의 Murine RNase Inhibitor 표준물질을 동일한 비율로 첨가한 반면, 높은 농도의 첨가 샘플은 곱셈 희석을 했습니다.
스파이크 회수율 = 측정값 / (스파이크 표준 x 50% + 스파이크 표본 값 x 50%)
샘플 희석 비율 |
측정값(ng/mL) |
희석 선형성 |
샘플 스파이킹 |
측정값(ng/mL) |
회수율 |
S+Std1 |
71.493 |
/ |
S+Std1 |
71.493 |
110.3% |
2× |
43.571 |
121.9% |
S+Std3 |
20.569 |
122.2% |
4× |
22.174 |
101.8% |
S+Std5 |
5.516 |
114.2% |
8× |
13.132 |
118.5% |
에스 |
1.661 |
/ |
16× |
6.058 |
92.3% |
/ |
/ |
/ |
테이블 2. 정확도 검증
두 배로 희석한 샘플, 다른 농도의 스파이크를 첨가한 샘플, 스파이크를 첨가하지 않은 샘플에서의 Murine RNase Inhibitor의 선형 회수율과 스파이크 회수율은 모두 80%~125% 범위에 있었습니다(표 2).
서류:
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