설명
T7 RNA 중합효소는 T7 프로모터 서열(5'-TAATACGACTCACTATAG*-3')을 포함하는 이중가닥 DNA를 주형으로, NTP를 기질로 사용하여 프로모터 하류의 DNA 역가닥에 상보적인 RNA를 합성합니다. 평활 말단이나 5' 돌출부를 가진 선형 이중가닥 DNA는 모두 T7 RNA 중합효소의 주형 기질로 사용될 수 있으며, 이는 선형화된 플라스미드 또는 PCR 산물을 시험관 내 RNA 합성의 주형으로 사용할 수 있음을 의미합니다.
이 키트는 샌드위치 효소면역측정법(ELISA) 원리를 이용하여 잔류 T7 RNA 중합효소를 검출합니다. T7 RNA 중합효소 표준물질과 검사 시료를 항-T7 RNA 중합효소 항체(36705-A)로 미리 코팅된 마이크로플레이트 웰에 넣습니다. 희석된 비오틴 표지 T7 RNA 중합효소 검출 항체(36705-C)를 첨가한 후, 스트렙타비딘-HRP(SA-HRP)(36705-D)를 첨가하여 항체 + 항원 + 항체-비오틴 + SA-HRP 복합체를 형성합니다. 세척 후, 발색을 위해 TMB 기질(36705-H)을 첨가합니다. TMB는 HRP에 의해 촉매되어 무색에서 청색으로, 정지 용액(36705-I)을 첨가하면 최종적으로 황색으로 변합니다. 황색의 강도는 시료에서 검출된 T7 RNA 중합효소의 양과 양의 상관관계를 나타냅니다.
구성 요소
|
아니요. |
이름 |
36705ES48 |
36705ES96 |
|
36705-A |
항-T7 RNA 중합효소 코팅 마이크로타이터 스트립 |
48 티 |
96티 |
|
36705-B* |
표준: T7 RNA 중합효소 |
1 바이알 |
2 바이알 |
|
36705-C |
발각 항체 : 바이오틴 결합 항체 |
60 μL |
120 μL |
|
36705-D |
스트렙타비딘-HRP |
30 μL |
60 μL |
|
36705-E |
희석 완충액 1 |
25 mL |
45 mL |
|
36705-F |
세척 완충액 농도 비율(20×) |
25 mL |
50 mL |
|
36705-G |
희석 완충액 2 |
15 mL |
30 mL |
|
36705-H |
TMB 기판 |
8 mL |
15 mL |
|
36705-I |
해결책 중단 |
5 mL |
10 mL |
|
36705-J |
플레이트 실러 |
각각 3개씩 |
각각 5개씩 |
*표준 36705-B는 동결건조 분말입니다.
T7 RNA 중합효소 10625 , 10628 및 10629와 호환됩니다.
검증 데이터
표 1. 선형성 범위: 1~32ng/mL , R2=0.999 , CV≤5%。
|
표준 |
농도. （ ng/mL） |
평균 （ ng/mL） |
회복 ( %) |
CV% |
|
1학년 |
32 |
31.965 |
99.9% |
2.2% |
|
2학년 |
16 |
16.070 |
100.5% |
5.0% |
|
3학년 |
8 |
7.812 |
97.7% |
2.1% |
|
4학년 |
4 |
4.192 |
104.8% |
0.8% |
|
5단계 |
2 |
2.020 |
101.8% |
3.5% |
|
6학년 |
1 |
1.173 |
117.3% |
0.0% |
|
NC |
0 |
/ |
/ |
/ |
표 2. 높은 특이성
|
단백질 이름 |
농도 |
감지 여부 |
|
긍정적 통제 |
1ng/mL |
감지됨 |
|
부정적 통제 |
0ng/mL |
nd |
|
울트라뉴클레아제 |
1 0 μg/mL |
nd |
|
솔트 액티브 울트라뉴클레아제 |
1 0 μg/mL |
nd |
|
DNA 분해 효소 I |
1 0 μg/mL |
nd |
|
쥐 RNase 억제제 |
1 0 μg/mL |
nd |
|
백시니아 캡핑 효소 |
1 0 μg/mL |
nd |
|
무기 피로인산가수분해효소 |
1 0 μg/mL |
nd |
|
mRNA 캡 2´-O-메틸트랜스퍼라제 |
1 0 μg/mL |
nd |
|
1%BSA |
1 0 μg /mL |
nd |
표 3. LOQ: 이 제품의 정량 한계는 표준 곡선의 최저 농도 지점을 희석하여 결정되며, 이때 최저 농도에서의 변동계수(CV)가 20% 미만입니다. 이는 정량 한계로 정의되며, 1 ng/mL입니다.
|
S td6 이론값 ( ng/mL ) |
표준 6 테스트 평균값 ( ng/mL ) |
테스트 반복 |
CV% |
회복 |
|
1 |
0.858 |
24 |
12.6% |
85.8% |
표 4. LOD: 본 제품의 검출 한계는 음성 대조군(NC)의 평균 검출값에 표준 편차의 두 배를 더한 표준 농도로 정의됩니다. 24개의 NC 표준물질을 측정하여 평균과 표준 편차를 계산한 결과, 검출 한계는 0.318 ng/mL로 결정되었습니다.
|
평균값 （ OD ） |
SD （ OD ） |
평균값 +2SD(OD) |
평균값 +2SD (ng/mL) |
|
0.0527 |
0.0038 |
0.0604 |
0.3176 |
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