설명
이 변이체는 야생형 T7 RNA 중합효소에서 유래하여 대장균에서 생산된, 공학적으로 조작된 T7 RNA 중합효소 변이체(저 dsRNA)입니다. 캡 유사체를 효율적으로 결합시키면서 이중가닥 RNA(dsRNA) 생성을 현저히 감소시키고, 야생형 T7 RNA 중합효소와 유사한 고효율의 시험관내 전사(IVT)를 나타냅니다. T7 프로모터 서열(5'-TAATACGACTCACTATAG*-3')로부터 이중가닥 DNA의 5'→3' RNA 합성을 촉매하며, NTP를 기질로 사용합니다.
참고: G*는 RNA 전사본의 첫 번째 염기입니다.
특징
- dsRNA 수준이 약 1/100000으로 낮아짐
- Trilink CleanCap AG, LZCap과 호환 가능
- WT와 비슷한 높은 수율
- 하단 캡 입력
- 동물성 원료 미사용(AOF)
구성 요소
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구성품 번호 |
이름 |
10629ES10 |
10629ES60 |
10629ES72 |
10629ES86 |
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(10쿠) |
(100쿠) |
(250쿠) |
(2,500 KU) |
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10629 |
Hieff™ T7 RNA 중합효소(GMP 등급, 저농도 dsRNA, 250 U/μL) |
40 μL |
400 μL |
1mL |
10mL |
명세서
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원천 |
재조합 T7 RNA 중합효소 유전자를 가진 대장균 |
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최적 온도 |
37도 |
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저장 버퍼 |
50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0.1% Triton X-100, 50% (v/v) 글리세린, 25℃에서 pH 7.9 |
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단위 정의 |
37°C, pH 8.0에서 1시간 이내에 산불용성 침전물 내 [ 3 H] GMP 1nmol을 혼합하는 데 필요한 효소의 양을 1단위로 정의합니다. |
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추천 Mg2+ |
30mM 아세트산 마그네슘 |
품질관리 기준
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나는 항목 |
사양/표준 |
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효소 활동 |
250 - 300U/μL |
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단백질 순도 |
≥95% |
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내독소 |
<20 EU/mg |
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프로테아제 |
부정적인 |
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엑소뉴클레아제 |
부정적인 |
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니카제 |
부정적인 |
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RNase |
부정적인 |
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대장균 숙주 단백질 |
<50ppm |
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대장균 숙주 DNA |
<10fg/U |
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마이코플라스마 검사 |
부정적인 |
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Tris NTP는 dsRNA를 시너지적으로 감소시킵니다.
수치
그림 2. 쥐 RAW264.7 세포에서 IVT 생성물의 면역원성 평가(그림 2A 및 2B). 돌연변이체에서 생성된 mRNA를 형질감염시킨 RAW264.7 세포에서 IFN-β mRNA 및 단백질 수치는 야생형에 비해 감소하였다. 이는 야생형 T7 RNAP에서 합성된 mRNA가 가장 강력한 면역 반응을 유도한 반면, 돌연변이체에서 생성된 mRNA는 유의미하게 감소된 반응을 보였음을 시사한다.
그림 3. 셀룰로스 처리 후 CleaScript™ T7 RNA 중합효소로 합성된 mRNA의 dsRNA 함량은 야생형 효소로 합성된 mRNA의 dsRNA 함량보다 낮습니다.
배송 및 보관
제품은 드라이아이스와 함께 배송되며 -15℃ ~ -25℃에서 1년간 보관이 가능합니다.
출판:
엔지니어링된 T7 RNA 중합효소는 말단 전이효소 및 RNA 의존성 RNA 중합효소 활동을 낮춰 dsRNA 형성을 줄입니다. FEBS 저널 2025년 3월 3일
FADS 및 준합리적 설계 변형 T7 RNA 중합효소는 dsRNA 생성을 감소시켰으며, 말단 전이효소 및 RDRP 활성이 낮았습니다(bioxRxiv, 2024년 5월 31일).
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