설명
하이페어™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit (No Dye)는 Hifair™를 기반으로 개발된 고속 역전사 키트입니다. III 1st Strand cDNA 합성 키트(염료 없음)는 PCR 증폭 및 RT-qPCR 실험에 적합합니다. Hifair™ III 1st Strand cDNA 합성 키트(염료 없음)와 비교하여 안정적인 검출률, 특이성 및 수율 보장을 자랑하며, 총 역전사 시간을 6분 미만으로 단축하여 실험 시간을 크게 단축합니다.
이 키트에는 RNA 템플릿에 남아 있는 게놈 DNA 오염을 제거하여 더욱 신뢰할 수 있는 후속 결과를 보장하는 gDNA Digester Mix가 포함되어 있습니다. 이 키트는 랜덤 프라이머 N6와 올리고(dT) 18 의 두 가지 유형의 cDNA 합성 프라이머를 제공합니다. 사용자는 필요에 따라 랜덤 프라이머 N6, 올리고(dT) 18 또는 유전자 특이적 프라이머 중 하나를 역전사 프라이머로 선택할 수 있습니다. 합성된 단일 가닥 cDNA 생성물은 후속 PCR 또는 qPCR 반응에 바로 사용할 수 있습니다.
명세서
카탈로그 번호 |
11150ES10 / 11150ES60 |
크기 |
10톤/100톤 |
구성 요소
구성품 번호 |
이름 |
11150ES10 |
11150ES60 |
11150-A |
4× Hifair™AdvanceFast SuperMix(무염료) |
50 μL |
500 μL |
11150-B |
5×gDNA 다이제스터 믹스 |
20 μL |
200 μL |
11150-C |
랜덤 프라이머(50 μmol/L) |
20 μL |
200 μL |
11150-D |
Oligo d(T) 18 프라이머(50 μmol/L) |
20 μL |
200 μL |
11150-E |
RNase-free 물 |
200 μL |
2×1mL |
저장
본 제품은 -25~-15℃에서 보관하시기 바랍니다. 1년.
지침
- 실험에 잔류 게놈 DNA 제거가 필요한 경우
1) gDNA 소화
RNase가 없는 원심분리 튜브에 다음 혼합물을 넣고 부드럽게 피펫으로 잘 섞습니다. 42°C에서 2분간 배양합니다.
구성 요소 |
용량(μL) |
RNase-free 물 |
10 μL까지 |
5× gDNA 다이제스터 믹스 |
2 μL |
총 RNA* |
10pg-5μg |
또는 mRNA* |
10 pg-500 ng |
* 총 RNA의 투입량은 2μg을 초과하지 않는 것이 좋습니다. 표적 유전자의 발현량이 낮을 경우, 투입량을 최대 5μg까지 늘릴 수 있습니다.
2) 역전사 반응 시스템 준비(20 μL 시스템)
구성 요소 |
용량(μL) |
이전 단계의 반응 용액 |
10 μL |
4×Hifair™AdvanceFast SuperMix(무염료) |
5 μL |
Oligo d(T) 18 프라이머(50 μmol/L)** |
2 μL |
또는 랜덤 프라이머(* qPCR용) (50 μmol/L)** |
또는 2 μL |
RNase-free 물 |
20 μL까지 |
* 프라이머의 양은 템플릿 투입량에 따라 조절 가능합니다. 역전사 산물을 qPCR 실험에 사용하는 경우, 권장량에 따라 랜덤 프라이머를 시스템에 추가할 수 있습니다.
** 먼저 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix(무염료)를 첨가하고 잘 섞은 다음 역전사 프라이머를 첨가하여 프라이머가 gDNA Digester의 영향을 받지 않도록 하는 것이 좋습니다.
3) 역전사 과정 설정
온도 |
시간 |
55℃* |
5분** |
85℃ |
5초 |
* GC 함량이 높은 템플릿이나 복잡한 템플릿의 경우 역전사 온도를 60℃까지 높일 수 있습니다.
** 본 제품은 14kb 이하의 cDNA 서열을 합성할 수 있습니다. 더 긴 cDNA 생성물이 필요한 경우, 역전사 시간을 적절히 연장할 수 있습니다.
- 실험에 게놈 DNA 제거가 필요하지 않은 경우
1) 역전사 반응 시스템 준비(20 μL 시스템)
구성 요소 |
용량(μL) |
4×Hifair™AdvanceFast SuperMix(무염료) |
5 μL |
Oligo d(T) 18 프라이머(50 μmol/L)** |
2 μL |
또는 랜덤 프라이머(* qPCR용) (50 μmol/L)** |
또는 2 μL |
총 RNA* |
10pg-5μg |
또는 mRNA |
10 pg - 500 ng |
RNase-free 물 |
20 μL까지 |
* 총 RNA의 투입량은 2μg을 초과하지 않는 것이 좋습니다. 표적 유전자의 발현량이 낮을 경우, 투입량을 최대 5μg까지 늘릴 수 있습니다.
** 프라이머의 양은 템플릿 투입량에 따라 조절될 수 있습니다. 역전사 산물을 qPCR 실험에 사용하는 경우, 권장량에 따라 랜덤 프라이머를 시스템에 추가할 수 있습니다.
2) 역전사 과정 설정
온도 |
시간 |
55℃* |
5분** |
85℃ |
5초 |
* GC 함량이 높은 템플릿이나 복잡한 템플릿의 경우 역전사 온도를 60℃까지 높일 수 있습니다.
** 본 제품은 14kb 이하의 cDNA 서열을 합성할 수 있습니다. 더 긴 cDNA 생성물이 필요한 경우, 역전사 시간을 적절히 연장할 수 있습니다.
노트
- 모든 작업은 얼음 위에서 수행해야 하며 RNase 오염을 피하는 방식으로 수행해야 합니다.
- 본 제품은 연구용으로만 사용됩니다.
- 안전을 위해 실험실 가운과 일회용 장갑을 착용해 주시기 바랍니다.
서류:
결제 및 보안
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문의
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자주 묻는 질문
이 제품은 연구 목적으로만 사용되며 인간이나 동물의 치료 또는 진단용으로 의도되지 않았습니다. 제품과 콘텐츠는
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