그림 1. 숙주 세포에 부착된 마이코플라스마의 전자 현미경 사진
마이코플라스마 오염의 배경 및 위험
마이코플라스마는 알려진 원핵생물 중 가장 작고 단순한 생물로, 구형, 막대형, 사상형 등 다양한 형태로 존재합니다. 세포벽이 없어 일반적으로 직경이 0.1~0.3μm로, 표준 여과막(0.22~0.45μm)을 통과할 수 있습니다.
20종 이상의 마이코플라스마가 세포 배양에서 오염 물질로 확인되었으며, 오염 사례의 95% 이상이 마이코플라스마 오랄레 (Mycoplasma orale) , 마이코플라스마 아르기니니(Mycoplasma arginini) , 마이코플라스마 페르멘탄스 (Mycoplasma fermentans ) , 아콜레플라스마 레이드라위(Acholeplasma laidlawii) , 마이코플라스마 호미니스(Mycoplasma hominis) , 마이코플라스마 히오리니스(Mycoplasma hyorhinis )에 기인합니다. 문헌에 따르면, 보관된 세포주에서 마이코플라스마 오염 발생률은 15%~35%이고, 생물제약 산업에서는 0.44%~6.70%입니다. 국내 및 국제 약전과 규제 지침은 마이코플라스마 오염을 세포 형태 변화, 성장 억제, 대사 장애, 세포 증식 장애를 포함한 유해한 영향으로 인해 중요한 미생물 품질 관리 항목으로 분류합니다.
그림 2. 숙주 세포를 둘러싸고 감염시키는 마이코플라스마(주황색)는 유전자 발현 연구의 타당성을 잠재적으로 손상시킵니다.
1. 실험실 내 마이코플라스마 오염의 주요 경로는 무엇입니까?
오염원은 대체로 5가지 유형으로 분류할 수 있습니다.
A. 환경 오염 : 예를 들어, 세포 배양실, 인큐베이터 또는 생물 안전 캐비닛에 이미 존재하는 마이코플라스마.
B. 오염된 실험실 장비 : 예: 피펫, 피펫 팁, 배양 접시, 수조.
C. 오염된 배양 시약 : 예를 들어, 배지, 트립신, 혈청 및 냉동보존 용액.
D. 오염된 일차 세포 .
E. 실험실 직원의 부적절한 취급 .
2. 마이코플라스마 오염은 세포에 어떤 영향을 미치나요?
마이코플라스마에 오염된 세포는 다음과 같은 특징을 보일 수 있습니다.
맑은 배양 상층액
성장과 증식이 느려짐
필라멘트형 또는 광범위하게 퍼진 세포와 같은 비정상적인 형태
배지 변화나 FBS 농도 증가에 반응하지 않음
3. 실험실에서 마이코플라스마를 검출하는 일반적인 방법은 무엇입니까?
감지 방법은 다음과 같습니다.
문화 기반 방법
현장 염색
화학발광 분석
중첩된 PCR
특정 프로브를 사용한 qPCR
등온 증폭 및 비색 분석
이들 중, 배양 기반 검출법은 국내 및 국제 마이코플라스마 검사에서 여전히 황금표준으로 남아 있습니다 .
4. 마이코플라스마 제거 방법은 무엇입니까?
제거 전략의 선택은 샘플 유형에 따라 달라집니다.
생물학적 제품 : 최적의 방법은 고압증기멸균 후 폐기하는 것입니다.
종양 세포 또는 잡종 세포 : 이 세포는 동종 동물 모델에 접종할 수 있습니다(예: 누드 마우스의 피하 또는 복강 내 접종). 이렇게 하면 숙주의 면역 체계를 활용하여 마이코플라스마를 제거한 후 원하는 세포를 수확하고 대식세포를 제거할 수 있습니다.
귀중한 세포주 : 고압멸균이 불가능한 경우, 마이코플라스마 제거 시약을 배양액에 첨가할 수 있습니다(항생제 기반 또는 비항생제).
실험실 환경 : 배양실의 정기적 소독, 세포 배양에 대한 표준화된 SOP 준수, 마이코플라스마가 없는 것으로 인증된 시약 및 소모품의 엄격한 선택이 권장됩니다.
5. 일반적인 마이코플라스마 제거 시약의 작용 기전은 무엇입니까?
마이코플라스마 제거 전략은 일반적으로 세 가지 범주로 나뉩니다.
A. DNA 합성 억제제
예 : 플루오로퀴놀론계 항생제
기전 : DNA 복제 억제
참고 : 단일 항생제를 장기간 사용하면 내성이 발생할 수 있습니다. 효과가 감소하면 다른 항생제로 전환하거나 병용 요법을 사용하십시오.
B. 단백질 합성 억제제
예 : 마크로라이드, 테트라사이클린, 디테르펜
작용기전 : 마이코플라스마의 단백질 생합성 억제
참고사항 : 단독요법으로 인해 내성이 생길 수도 있으므로 약제를 번갈아 사용하거나 복합 항생제를 사용하는 것이 좋습니다.
C. 비항생제 시약
예 : 막 활성 펩타이드
기전 : 마이코플라스마 세포막에 특이적으로 결합하여 파괴함으로써 완전한 박멸을 유도함
장점 : 내성 발생 위험 없음, 제거 효율이 거의 100%, 숙주 세포에 대한 세포 독성이 최소화됨.
제품 개요
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제품명 |
사양 |
카탈로그 번호 |
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1mL/5mL |
40608ES03/08 |
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10회 분석/20회 분석 |
40601ES10/20 |
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100 μL/1 mL/5×1 mL |
40607ES01/03/08 |
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25톤/100톤 |
40612ES25/60 |
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25톤/100톤 |
40619ES25/60 |