형질감염은 세포 기반 실험에서 가장 널리 사용되는 기술 중 하나입니다. 다양한 방법을 사용하여 외인성 핵산을 세포 내로 도입하여 세포의 특성을 변화시킴으로써 유전자 기능 및 단백질 발현 연구를 가능하게 합니다. 형질감염 방법은 다양한 메커니즘에 따라 크게 세 가지 유형으로 분류할 수 있습니다. 물리적 방법(예: 전기천공법, 유전자총, 미세주입법), 화학적 방법(예: 인산칼슘, 양이온 리포좀, 양이온 중합체), 생물학적 방법(예: 레트로바이러스, 아데노바이러스)입니다.
실험실에서 가장 흔히 사용되는 형질전환 시약으로서 사용 시 어떤 예방 조치를 취해야 합니까? 리포좀 기반 형질감염 시약 ?
그림 1: 리포좀 매개 DNA 형질감염의 메커니즘
시약 섹션
Q1. 리포좀 기반 형질감염 시약의 작동 원리는 무엇입니까?
리포좀은 양전하를 띠고 정전기적 상호작용을 통해 핵산과 결합하여 핵산-리포좀 복합체를 형성합니다. 이 복합체는 세포막에 흡착되어 막융합 또는 엔도사이토시스를 통해 세포 내로 유입됩니다. 최종적으로 DNA는 엔도좀에서 세포질이나 핵으로 방출되어 전사 및 발현될 수 있습니다.
Q2. 리포좀 기반 형질감염 시약은 보관 시 냉동이 필요한가요?
아니요, 냉동 보관해서는 안 됩니다. 리포좀 기반 형질감염 시약은 4°C에 보관해야 합니다. 리포좀의 산화는 형질감염 효율에 부정적인 영향을 미칠 수 있으므로 공기에 장시간 또는 반복적으로 노출되지 않도록 하십시오.
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Q3. 형질감염 복합체를 제조할 때 혈청이 존재할 수 있나요?
아니요. 형질감염 복합체를 제조할 때는 무혈청 배지(일반적으로 Opti-MEM)를 사용하는 것이 좋습니다. 혈청 내 음전하를 띤 단백질은 리포좀과 핵산의 결합을 방해하여 복합체 형성에 영향을 미칠 수 있습니다.
Q4. 형질감염 중에 항생제를 첨가할 수 있나요?
형질감염 과정의 어떤 단계에서도 항생제를 첨가해서는 안 됩니다. 형질감염은 세포막 투과성을 증가시켜 항생제의 세포독성 효과를 증폭시켜 세포 사멸을 초래할 수 있습니다.
Q5. 형질전환 과정을 중단해야 하나요?
아니요. 리포좀 복합체는 최대 6시간 동안 안정합니다. 형질감염 전에 배지를 교체하지 않은 경우, 세포 성장에 필요한 충분한 영양분을 확보하기 위해 4~6시간 후에 새로운 배양 배지로 교체하는 것이 좋습니다. 단, 형질감염 전에 배지를 교체한 경우 추가 배지 교체는 필요하지 않습니다.
실험적 최적화 팁
그림 2: Hieff Trans Reagent를 사용한 리포좀 기반 형질감염 워크플로
Q6. 리포좀 기반 형질감염 시 주요 고려 사항은 무엇입니까?
세포 도금 밀도: DNA 형질감염의 경우 90%~95% 밀도, RNA 형질감염의 경우 30%~50%.
고순도 DNA는 형질전환 효율을 향상시킵니다.
혈청이 없는 배지를 사용하여 DNA와 형질전환 시약을 희석합니다.
형질감염 중에는 배양 배지에 항생제를 넣지 마십시오 .
시약은 4°C에 보관하고 , 장기간 공기에 반복적으로 노출되는 것을 피하세요.
시약을 처음 사용할 때는 DNA와 시약의 비율을 최적화하십시오 . 일반적인 DNA와 형질전환 시약의 비율은 1:2~1:3입니다.
Q7. 여러 플라스미드를 동시에 형질감염시킬 수 있나요? DNA와 RNA를 동시에 형질감염시킬 수 있나요?
네, 여러 플라스미드를 공동 형질감염시킬 수 있지만, 예비 실험을 권장합니다. 총 DNA 양은 일반적으로 일정하게 유지하며, 각 플라스미드의 비율은 크기, 구조 및 원하는 발현량에 따라 조절해야 합니다. DNA와 siRNA를 공동 형질감염시키는 것도 가능하지만, 이 경우 siRNA 형질감염 효율이 떨어질 수 있습니다.
Q8. 형질감염 시 세포 상태에 대한 요건이 있나요?
생존율이 90% 이상인 건강한 세포를 사용하십시오. 형질감염 24시간 전에 세포를 계대 배양하여 회복시키십시오. 과다 계대 배양된 세포는 피하고, 마이코플라스마, 곰팡이, 박테리아와 같은 오염 물질이 없는지 확인하십시오. 항상 신선한 배양 배지를 사용하십시오.
Q9. 플라스미드 크기가 리포좀 기반 형질감염 효율에 영향을 미치나요?
네. 플라스미드 크기가 증가할수록 형질감염 효율은 감소하는 경향이 있습니다. 최적의 결과를 얻으려면 플라스미드 크기가 10kb 미만이어야 합니다. 플라스미드 크기가 클수록 형질감염 효율이 크게 떨어질 수 있습니다.
제품 개요
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제품명 |
사양 |
카탈로그 번호 |
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0.5mL/1mL/5mL |
40802ES02/03/08 |
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0.5mL/1mL/5mL |
40808ES02/03/08 |
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500 μL/5× 500 μL |
40804ES76/86 |
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0.5mL/1mL |
40806ES02/03 |
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25 μL/100 μL/1 mL |
40810ES25/01/03 |
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1.5mL/10mL/100mL |
40820ES04/10/60 |
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Hieff Trans ™ 현탁액 무세포 리포좀 형질감염 시약 |
100 μL/0.5 mL/1.0 mL/5×1 mL |
40805ES01/02/03/08 |