하원으로의 이동 억제
이 문제는 불충분한 화학주성 기울기 또는 하부 챔버에 효과적인 화학주성 물질이 부족하여 발생할 수 있습니다. 이 문제를 해결하려면 세포 주기를 동기화하기 위해 분석 전 12~24시간 동안 세포에 혈청을 공급하지 않는 것이 좋습니다. 적절한 음성 및 양성 대조군을 포함해야 합니다. 하부 챔버에 혈청이나 다른 화학주성 물질의 농도를 높일 수도 있습니다. 또한, 과도한 세포 계대는 세포 생존율과 이동 능력을 저하시킬 수 있으므로, 저계대 세포가 권장됩니다. 또 다른 중요한 요인은 트랜스웰 인서트의 기공 크기입니다. 기공 크기가 너무 작으면 세포 이동을 방해할 수 있으므로, 기공 크기가 더 큰 인서트를 사용하는 것이 도움이 될 수 있습니다. 침투 분석의 경우, 너무 두꺼운 마트리젤 층도 세포 이동을 방해할 수 있습니다. 예비 실험 중에는 용량을 줄이고 배양 시간을 최적화하는 것이 좋습니다. 마지막으로, 멤브레인 인서트 아래의 기포는 세포 이동을 방해할 수 있으므로 주의하십시오. 준비 과정에서 기포를 제거해야 합니다.
세포의 과도이동 또는 과소이동
적절한 세포 분주 밀도와 배양 시간을 결정하기 위해 대조군 세포주를 사용하여 예비 최적화 실험을 수행하는 것이 좋습니다. 분주 시점의 세포 상태 불량, 부정확한 세포 계수, 또는 부정확한 부피 계산은 모두 세포 이동에 영향을 미칠 수 있습니다. 계수 중 세포 생존율이 낮으면 실험을 연기해야 합니다. 균일한 분포를 유지하기 위해 세포 계수 전과 분주 전에 세포를 완전히 재현탁해야 합니다.
염색 후 불균일한 세포 분포
균일하게 분포되도록 삽입물을 평평한 표면에 놓으십시오. 파종 전에 세포 현탁액을 완전히 혼합하십시오. 파종 후, 삽입물을 생물안전작업대에서 잠시 흔들림 없이 그대로 두었다가 인큐베이터로 옮기십시오. 옮길 때는 기울어지거나 진동하지 않도록 조심스럽게 다루고, 흔들림을 방지하기 위해 인큐베이터 문을 조심스럽게 닫으십시오. 심한 세포 응집이 관찰되면 세척 단계 수를 늘리거나 배양 배지를 교체하여 덩어리와 응집물을 제거하십시오.
일관되지 않은 실험 재현성
먼저, 세포 계수의 부정확성이나 접종 전 세포 현탁액 혼합 실패가 원인인지 평가하십시오. 세포를 삽입물에 넣기 전에 매번 현탁액을 혼합하는 것이 좋습니다. 실험 프로토콜을 표준화하고 동일한 배치의 시약과 소모품을 사용하는 것도 재현성을 향상시킬 수 있습니다.
실험군과 대조군 간의 뚜렷한 차이점 부족
몇 가지 요소를 고려해야 합니다. 세포 유형에 적합한 막 기공 크기를 확보하고, 이동 잠재력이 감소할 수 있는 과도하게 계대 배양된 세포를 사용하지 않도록 하며, 설정 과정에서 화학 유인 물질 농도 구배가 정확하게 설정되었는지 확인해야 합니다. 각 처리군에 양성 대조군을 포함시키면 절차상의 오류를 파악하는 데 도움이 될 수 있습니다. 영상 촬영 전에 삽입물의 윗면을 깨끗이 닦아 관찰에 방해가 될 수 있는 잔여 세포나 염색을 제거하십시오.
이동 또는 침입된 세포의 모호한 시각화
배경 염색이 심해서 그럴 수 있습니다. 깨끗한 시약을 사용하고 삽입 멤브레인을 조심스럽게 다루어 배경을 제거하십시오. 여러 번 부드럽게 닦아야 할 수도 있습니다. 삽입 멤브레인은 다공성이므로 영상 촬영 시 세포와 멤브레인 기공을 구분하는 데 주의하십시오. 길쭉하거나 퍼진 형태가 관찰되지 않으면 배양 시간이 너무 짧았을 수 있습니다. 배양 시간을 늘리면 침습성 또는 이동성 세포의 시각화가 향상될 수 있습니다.
제품 개요
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제품명 |
사양 |
카탈로그 번호 |
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1롤 |
36125ES03 |
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20T/50T/100T |
40302ES20/50/60 |
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20T/50T/100T |
40305ES20/50/60 |
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10mL/100mL |
40202ES80/92 |
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1mL/5×1mL/50×1mL/100×1mL |
11184ES03/08/50/60 |
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1mL/5×1mL |
11188ES03/08 |
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1mL/5×1mL |
11189ES03/08 |
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1mL/5×1mL |
11190ES03/08 |
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1mL/5×1mL |
11171ES03/08 |
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20톤/200톤 |
11175ES20/70 |