国家薬品監督管理局の医薬品評価センター（CDE）は、遺伝子治療製品のガイドラインの中で、DNA残留量と残留断片のサイズを制御する必要があると明確に述べており、DNA残留断片のサイズを可能な限り200 bp以下に制御することを推奨しています。したがって、バイオ医薬品における残留核酸の除去は非常に重要です。生産プロセスの複雑さが増すにつれて、高塩分環境での残留核酸の効果的な除去は、多くの新しい課題に直面しています。
- AAVウイルスの精製プロセスでは、ウイルスの回収率を向上させるために、塩濃度の高い緩衝液（200～500 mM）が使用されることが多い。しかし、従来のヌクレアーゼは塩濃度が上昇すると活性が大幅に低下する。酵素の量を増やして培養時間を増やすことで精製効果を向上させると、コストが大幅に増加する。
- 宿主DNAは通常クロマチンの形で存在し、タンパク質によって容易にカプセル化されるため、DNAにアクセスできなくなります。高塩分環境では、核酸とタンパク質は効果的に分離できるため、残留核酸をよりよく除去できます。
- AAVなどのウイルスベクターは静電相互作用により凝集する可能性があり、この凝集は低イオン強度および残留DNA条件下で発生する可能性が高く、安定性の低下を招き、収量に影響を与えます。塩濃度を高めると、AAVウイルス粒子の凝集を効果的に減らすことができ、AAVウイルス粒子の回収率が向上します。
Salt Active UltraNuclease（耐塩性広域スペクトルヌクレアーゼ）は、海洋微生物由来の組み換え非特異的エンドヌクレアーゼです。UltraNucleaseと比較すると、500 mMの塩濃度で最適な活性を示し、高塩分環境でも核酸汚染を効率的に除去できます。
製品応用シナリオ
- 生物製剤中の残留核酸の除去: ウイルス、ワクチン、タンパク質などの生物製剤の製造中に、UltraNuclease を添加して残留核酸を分解することができます。このステップにより、ウイルスの収量が増えるだけでなく、残留核酸の含有量が大幅に減少し、薬剤の安全性と有効性が確保されます。
- 粘度低下: 核酸を分解することで細胞溶解物の粘度が低下し、ウイルス、AAV ベクター、封入体などの細胞由来粒子の精製中に濾過/限外濾過プロセスが容易になります。
- 解像度と回収率の向上: ELISA、2 次元電気泳動、免疫ブロッティング分析において、解像度と回収率が向上します。
- 細胞凝集の防止: UltraNuclease は、ヒト末梢血単核細胞 (PBMC) の凝集を効果的に防止できます。
製品性能テスト
高塩分環境が酵素活性に与える影響（Na+）
Salt Active UltraNucleaseの使用に合わせて、
この目的のために、
Salt Active UltraNuclease ELISA キットを使用して残留 Salt Active UltraNuclease を検出する実験プロセス。
UltraNuclease および Salt Active UltraNuclease ELISA キットの特徴:
規制コンプライアンス:規制要件に従って完全に検証されており、検証レポートが利用可能です。
品質保証:キットの原材料はすべて独自に開発されており、管理可能な品質が保証されています。
高感度:定量限界は 23 pg/mL まで低下します。
高精度:バッチ内再現性が高く、バッチ間変動性が低い。
強い特異性：他の遺伝子組み換え細胞タンパク質との交差反応性なし
パフォーマンスパラメータ
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製品パラメータ |
コンテンツ |
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分析時間 |
3.5時間 |
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アッセイ原理 |
2部位免疫酵素アッセイ |
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信号増幅 |
ビオチン-ストレプトアビジン系 |
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検出波長 |
450nmと630nm |
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感度 |
0.024ng/mL |
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検出範囲 |
0.047 ng/mL～3 ng/mL |
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検出対象 |
ソルトアクティブウルトラヌクレアーゼ |
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適用可能な機器 |
分子デバイス：Mおよびiシリーズ |
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応用 |
細胞・遺伝子治療および組み換えアデノ随伴ウイルスワクチンの精製プロセスにおける残留ヌクレアーゼの検出 |
製品データ:
試薬キット標準曲線:
特異性
Salt Active UltraNuclease 抗体とキット内の 7 つのタンパク質との交差反応性は、このキットを使用して 7 つのプロセスで追加されたタンパク質を検出することによって評価されました。陽性コントロール (PC-0.047 ng/mL) と陰性コントロール (NC-0 ng/mL) が設定されました。
結果は、7つのプロセスで追加されたタンパク質が陰性対照（NC-0 ng/mL）に近く、検出濃度がこのキットの定量限界（0.047 ng/mL）よりも低く、交差反応は観察されなかったことを示しました。
Sスパイク回復率:
スパイク回収実験のために顧客から提供された 2 つのサンプルに、3 つの濃度標準 (Std1 3 ng/mL、Std3 0.75 ng/mL、Std5 0.188 ng/mL) を等量加えます。結果は、スパイク回収率がすべて 80% から 120% の間であることを示しています。スパイク回収率 % = (スパイクサンプルの測定値 - スパイクなしサンプルの測定値) / 理論値 (追加した標準の量) * 100%。
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サンプル名 |
Salt Active UltraNucleaseの試験濃度（ng/mL） |
標準物質の量（ng/mL） |
検査結果（ng/mL） |
スパイク回復率（％） |
|
TS1 |
0.04 |
3 |
1.71 |
114.00% |
|
0.75 |
0.347 |
92.53% |
||
|
0.188 |
0.085 |
90.43% |
||
|
TS2 |
0.08 |
3 |
1.772 |
118.13% |
|
0.75 |
0.405 |
108.00% |
||
|
0.188 |
0.104 |
110.64% |
正確さ
1) 再現性
高、中、低濃度の 3 つの Salt Active UltraNuclease 標準製品が繰り返し実験用に選択されました。同じ実験で、各濃度のサンプルを 10 回テストし、CV% < 10% でした。
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バッチ内差異 |
|||
|
理論濃度 (ng/mL) |
繰り返し回数 |
平均（ng/mL） |
変動係数CV（％） |
|
1.5 |
10 |
1.444 |
2.97% |
|
0.188 |
10 |
0.196 |
2.27% |
|
0.047 |
10 |
0.051 |
2.56% |
2) 中精度
3 つの実験には異なるキットのバッチが使用され、各実験は高、中、低の 3 つの濃度で実行され、各濃度が 10 回繰り返されました。各濃度ポイントから合計 30 のデータが得られ、各濃度の CV% は 15% 未満でした。
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バッチの違い |
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|
理論濃度 (ng/mL) |
実験回数 |
平均（ng/mL） |
変動係数CV（％） |
|
1.5 |
3 |
1.423 |
5.70% |
|
0.188 |
3 |
0.212 |
5.59% |
|
0.047 |
3 |
0.059 |
6.82% |
製品情報
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製品名 |
製品番号 |
製品仕様 |
|
20159ES25/50/60/80/90 |
25区/50区/100区/1MU/5MU |
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36703ES96 |
96T |
その他の関連製品
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製品名 |
製品番号 |
製品仕様 |
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20157ES25/50/60/80/90 |
25区/50区/100区/1MU/5MU |
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|
36701ES59 |
96T |