背景説明

タンパク質の精製は、標的タンパク質の生物学的活性と化学的完全性を維持しながら、実験サンプル中の全タンパク質から標的タンパク質を分離するプロセスです。ベクターの構築中は、いくつかの必要な発現要素に加えて、コドンの最適化とタグの選択も考慮する必要があります。適切なタグを選択することは、タンパク質の精製とタンパク質の溶解性の促進に有益であるだけでなく、タンパク質の構造と機能、および下流のアプリケーションに影響を与えないようにする必要があります。このセクションでは、His タグと GST タグの紹介に焦点を当てます。

表1. HisとGSTタグの紹介

タグ	サイズ kDa	順序	純度	溶解度	タグの削除	タグ切断酵素
彼の	約0.84	うーん	+	+	不要	TEVプロテアーゼ
GST	26	211人から構成 アミノ酸	++	++	必須	3Cプロテアーゼ/PSP

Hisタグタンパク質アフィニティー精製

HisSep Ni-NTAアガロース樹脂は、マトリックスとして高度に架橋されたアガロースゲルをベースに、リガンドとして四配位ニトリロ三酢酸（NTA）と化学的に結合し、ニッケルイオン（Ni ²⁺ ）をキレートした後、ニッケルイオンを八面体の中心に置く非常に安定した八面体構造を形成します。この構造は、ニッケルイオンを小分子の攻撃から保護することができます。Ni-IDA樹脂と比較して、より安定しており、過酷な条件下での還元剤、変性剤、またはカップリング剤の一定濃度に耐えることができます。Ni-TED樹脂と比較して、ターゲットタンパク質に対する吸着容量が大きく、実験室でのHisタグタンパク質の精製に欠かせない樹脂の1つとなっています。

図1. His樹脂の製品原理図。

表2. Yeasen His 浄化製品選択ガイド

製品番号	20502ES	20503ES	20504ES/20505ES	20561ES
製品名	HisSep Ni-NTA アガロース樹脂	HisSep Ni-NTA アガロース樹脂 6FF	HisSep Ni-NTA 6FF クロマトグラフィー カラム、5 mL / 1 mL	HisSep Ni-NTA マグビーズ
マトリックス	架橋6%アガロースゲル	高度に架橋された6%アガロースゲル	高度に架橋された6%アガロースゲル	磁性アガロース微粒子
耐圧性	0.1 MPa、1 バール	0.3 MPa、3 バール	0.3 MPa、3 バール	該当なし
容量	＞40 mg 6×Hisタグタンパク質/mLマトリックス	＞40 mg 6×Hisタグタンパク質/mLマトリックス		> 40 mg 6×Hisタグタンパク質/mL磁気ビーズ
浄化の提案	中程度の耐圧性を持つマトリックス、インキュベーション法、重力カラム小規模精製に適しています	耐圧性の高いマトリックスで、タンパク質精製装置による工業規模のタンパク質精製に使用可能		磁気分離による迅速かつ便利なタンパク質精製
許容範囲	8 M尿素、6 M塩酸、0.5～1 mM DTT、1 mM EDTAなど
応用	Hisタグタンパク質精製は第一選択であり、高負荷、中程度の耐性があり、特に原核生物発現精製システムに適しています。

付録: HisSep Ni-NTA MagBeads (カタログ番号 20561ES) 製品の特徴

1. 従来のプレパックカラムや樹脂と比較すると、サンプルを複数回遠心分離したり、サンプルの流量を制御したりする必要がないため、精製時間が大幅に短縮されます。
2. ワンステップ精製で対象タンパク質の純度95%以上を達成できます。
3. 高い目標タンパク質収率：収率は 70 ～ 80% に達します。
4. 最大5回まで再利用できます。
5. 対象タンパク質の濃度と量を簡単に調整できます。
6. タンパク質の損失が少なく、タンパク質の変性や沈殿のリスクがありません。

GST タグ タンパク質アフィニティー精製媒体

GST タグタンパク質アフィニティークロマトグラフィーは、硫黄結合を介して GST 融合タンパク質と固定グルタチオン (GSH) との間の共有結合親和性を利用し、GSH 交換溶出の原理に基づいて精製します。この精製では、硫黄結合を介してグルタチオンをゲルのアームに結合し、次にグルタチオンとグルタチオン S トランスフェラーゼ (つまり、GST タグ) 間の特定の作用力を使用して、GST タグ融合タンパク質をゲル上のアーム グルタチオンと結合させ、それによって標識タンパク質を他のタンパク質から分離します。グルタチオンには通常、酸化型 GSSG と還元型 GSH があります。GSH 溶出を使用すると、GSH はゲルのグルタチオンと競合して融合タンパク質と結合し、それによって目的のタンパク質を溶出します。

GSTSep グルタチオンアガロース樹脂は、GST タグタンパク質精製樹脂であり、構造的には、12 原子アームを介して、還元グルタチオンと 6% アガロースゲルをマトリックスとして化学的に共有結合させることによって作られています。この設計により、樹脂の精製効率が大幅に向上し、培地 1 ミリリットルあたり 20 mg を超える GST 融合タンパク質を運ぶことができます。この製品は、特異性とコストパフォーマンスに優れており、さまざまなグルタチオン S トランスフェラーゼ、グルタチオン依存性タンパク質、グルタチオン組換え誘導体を 1 ステップで精製できます。

表3. Yeasen GST精製製品選択ガイド

製品番号	20507ES	20508ES	20509ES/20510ES	20562ES
製品名	GSTSep グルタチオンアガロース樹脂	GSTSep グルタチオンアガロース樹脂 4FF	GSTSep グルタチオン 4FF クロマトグラフィーカラム、1 mL / 5 mL	GSTSep グルタチオン マグビーズ
マトリックス	架橋6%アガロースゲル	高度に架橋された4%アガロースゲル	高度に架橋された4%アガロースゲル	磁性アガロース微粒子
耐圧性	0.1 MPa、1 バール	0.3 MPa、3 バール	0.3 MPa、3 バール	該当なし
容量	>20 mg GSTタンパク質（40 kDa）/mLマトリックス	>10 mg GSTタンパク質（40 kDa）/mLマトリックス		5～10 mg GST タグ融合タンパク質/mL 磁気ビーズ
応用	高負荷、中程度の耐圧性を持つマトリックス、インキュベーション法、重力カラム小規模精製に適しており、実験室規模の顧客に推奨されます。	用途 低負荷、高マトリックス圧力耐性、タンパク質精製装置による工業用大規模タンパク質精製に使用でき、スケールアップが容易		磁気分離による低負荷、高速、便利なタンパク質精製

付録: GSTSep グルタチオン マグビーズ (カタログ番号 20562ES) 製品の特徴

1. 磁気分離により、生物学的サンプルから高純度のターゲットタンパク質をワンステップで直接精製し、精製プロセスを大幅に簡素化し、精製効率を向上させます。科学研究​​や産業分野での便利な GST 融合タンパク質の精製に適しています。
2. この磁気ビーズを GST プルダウン実験に使用すると、磁気分離では複数回の遠心分離や長いインキュベーション時間が必要ないため、従来のクロマトグラフィー法に比べて操作がより簡単、高速、かつ自動化されます。

製品情報

製品の位置付け	製品名	製品番号	仕様
彼のタグタンパク質精製	HisSep Ni-NTA アガロース樹脂	20502ES10/50/60	10mL/50mL/100mL
	HisSep Ni-NTA アガロース樹脂 6FF	20503ES10/50/60	10mL/50mL/100mL
	HisSep Ni-NTA 6FF クロマトグラフィー カラム、5 mL	20504ES08/25	5mL/5×5mL
	HisSep Ni-NTA 6FF クロマトグラフィー カラム、1 mL	20505ES03/08	1mL/5×1mL
	HisSep Ni-NTA マグビーズ	20561ES08/25	5mL/25mL
GST タグ タンパク質精製	GSTSep グルタチオンアガロース樹脂	20507ES10/50/60	10mL/50mL/100mL
	GSTSep グルタチオンアガロース樹脂 4FF	20508ES10/50/60	10mL/50mL/100mL
	GSTSeP グルタチオン 4FF クロマトグラフィーカラム、1 mL	20509ES03/08	1mL/5×1mL
	GSTSeP グルタチオン 4FF クロマトグラフィーカラム、5 mL	20510ES08/25	5mL/5×5mL
	GSTSep グルタチオン マグビーズ	20561ES08/25	5mL/25mL